学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

小鼠三种胚胎干细胞表观相关基因的分析

作　者: 周文平
导　师: 曹更生
学　校: 河南大学
专　业: 动物学
关键词: 重编程表观遗传学诱导多能干细胞 DNA甲基化
分类号: Q813
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 67次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

细胞核的重编程可以通过将体细胞的细胞核移入卵母细胞,将体细胞和胚胎干细胞进行融合,以及向体细胞中转入几个转录因子例如Oct4, Sox2, C-myc, Klf4和Nanog的方法实现,然而细胞核的重编程需要经历复杂的过程,其中最为重要的就是细胞核所发生的表观遗传学变化,本文主要综诉了细胞核重编程的研究概况,产生干细胞的四种不同的方法和现代表观遗传学中干细胞的表观遗传学特性以及体细胞的表观遗传学变化。我们从培养ES细胞着手,通过一年的摸索初步建立了小鼠胚胎成纤维细胞的体外培养平台,并在此基础上利用小鼠胚胎成纤维细胞经过丝裂霉素c处理的方法建立了合格的胚胎细胞滋养层。同时综合国内外文献,采用对小鼠注射激素,超数排卵,冲取3.5天的受精卵,接种于小鼠胚胎成纤维细胞制作的滋养层细胞上,在体外培养下使受精卵正常发育,并孵化,进而使受精卵在体外贴壁,等内细胞团长大时用机械的方法挑取内细胞团,从而建立了三株小鼠的胚胎干细胞系,经过分子水平的鉴定,基本确定细胞系的成功。基于胚胎细胞完整的培养体系,我们成功培养了ES细胞系,核移植胚胎干细胞系,IPS细胞系各两株,在实验室培养扩大后分别提取了各个细胞系的总RNA。在此基础上设计定量引物,分别分析了与胚胎细胞表观相关的表观遗传学基因,主要包括与DNA甲基化相关的基因Dnmt1、Dnmt3b、Dnmt3L、Aicda、与H3K27me3相关的基因Ezh2 Kdm6b Kdm6a,与H3K4me相关的基因mllI LSDI与Histone Ac相关的基因Kat2a,以一株细胞ES细胞系作为对照,利用2-△△Ct法分析了这些基因在六株细胞系中的变化,结果显示,在6个细胞系中ntES2在各个基因中都比同类以及其他细胞系表达量要高,特别是在Dnmt1基因中要比同类细胞高出5倍多,由于此细胞在体外传代次数较长已达到25代,因此有可能在体外传代过程中引起细胞表观修饰的改变,此现象已在文献中有报道,对于此细胞系进一步的鉴定还需要进行。与H3K27me3相关的基因Ezh2、Kdm6b、Kdm6a、与H3K4me相关的基因mllI LSDI与Histone Ac相关的基因Kat2a在六个细胞系中的表达量均未表现出变化。与DNA甲基化相关的基因中,Dnmt1基因在各个细胞系中的表达没有表现出很明显的变化,而Dnmt3b基因在两株IPS细胞系中的表达量要比正常的ES细胞和核移植干细胞系低将近2倍。相反,Dnmt3L基因在两株IPS细胞系中的表达量比正常的ES细胞和核移植ES细胞系高将近4倍。单从与DNA甲基化相关的DNA甲基化转移酶来说,IPS细胞系与正常的ES细胞系和核移植干细胞系在这方面还是存在着不同的表观现象,从另一个角度来说,细胞的重编程程度上存在差异。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-9
1 引言  9-29
  1.1 细胞重编程研究进展  9-23
    1.1.1 重编程研究概论  9-11
    1.1.2 产生干细胞的方法  11-23
  1.2 表观遗传学研究概论  23-28
    1.2.1 干细胞的表观遗传特性  23-27
    1.2.2 体细胞的表观重编程  27-28
  1.3 本研究的目标和主要内容  28-29
2 材料与方法  29-49
  2.1 小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养和滋养层的准备  29-35
  2.2 小鼠胚胎干细胞的体外分离和鉴定  35-41
  2.3 表观相关基因的分析  41-49
3 结果和讨论  49-63
  3.1 小鼠胚胎成纤维细胞的分离和滋养层的制备  49-50
  3.2 小鼠胚胎细胞的建立  50-55
  3.3 所建细胞系的分子水平鉴定  55-57
  3.4 细胞系的复苏培养  57-58
  3.5 六个细胞系RNA 的提取和反转录  58
  3.6 六种细胞系中表观相关基因的定量分析  58-63
4 讨论  63-65
5 结论  65-67
参考文献  67-73
致谢  73-74

小鼠三种胚胎干细胞表观相关基因的分析

内容摘要

全文目录

相似论文