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抗禽传染性法氏囊病毒卵黄抗体的研制及应用

作　者: 张伦
导　师: 高轩；李明义
学　校: 河北农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 鸡传染性法氏囊病毒卵黄抗体免疫脱脂稳定性
分类号: S855.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

高免卵黄抗体近年来在我国畜牧业生产中得到了广泛应用,并取得了较好的疗效。但临床上使用的粗制卵黄抗体去脂不够彻底,其含有大量磷脂大分子等结构物质,容易堵塞注射器,注射后难吸收,有时还会引起肿胀、出血、坏死甚至严重的过敏反应,这些缺陷严重限制了卵黄抗体的大规模临床应用。本研究以抗鸡传染性法氏囊病毒卵黄抗体为试验对象,对卵黄抗体进行母源抗体的提高和脱脂的处理,研究出了既适合规模化生产需要又符合新兽药生物制品申请标准的卵黄抗体生产工艺。本试验分别以4种不同的免疫原对蛋鸡进行免疫。Ⅰ:鸡传染性法氏囊病毒油佐剂鸡胚组织灭活苗;Ⅱ:鸡传染性法氏囊病毒油佐剂囊毒组织灭活苗;Ⅲ:鸡传染性法氏囊病毒VP2基因工程苗;Ⅳ:鸡传染性法氏囊病毒VP2和囊毒等比例混合使用苗。蛋鸡免疫该抗原后可制备出相应的高效价的卵黄抗体,对抗体动态变化规律观测结果发现,鸡血清抗体IgG与卵黄抗体IgY动态变化规律基本一致,且发现VP2和囊毒在同时免疫时有协同免疫作用。通过试验条件的优化,建立了四种卵黄抗体的脱脂方法:PEG法、泊洛沙姆-辛酸法、水稀释法、水-辛酸法,使粗制的卵黄抗体经过处理后可以获得效价和性状稳定的脱脂抗体液。但通过综合比较,本试验最终确定由泊洛沙姆作为脂肪沉淀剂:泊洛沙姆浓度1.2%,辛酸浓度0.2%,不离心自然沉降后纱布过滤,其制得的抗体效价损失少,物理性状好。稳定性试验结果表明,传染性法氏囊病毒卵黄抗体(IBDV-IgY)在碱性、中性和弱酸性pH范围内都能保持较好的稳定性,而在强酸性范围内(pH3),抗体活性降低。37℃保存时,稳定性较差;-20℃和4℃保存时比较稳定,可保持6个月不变;在室温保存时6个月内基本没有变化。在70℃以上加热时稳定性差。胰酶消化8小时后,抗体活性保留率为50%。经过试验,找到了抗体液的最适用量和最佳治疗途径。鸡传染性法氏囊病毒卵黄抗体的攻毒保护试验结果表明,攻毒后24小时内,攻毒鸡每天肌肉1次注射效价为1:32的卵黄抗体1ml,连用3天,保护率达80%以上。同居感染试验结果表明,制得的法氏囊卵黄抗体能100%抵御法氏囊病毒的同居感染。综上所述,本研究成功制备出抗鸡传染性法氏囊病毒卵黄抗体,并研究了其体外稳定性,为该卵黄抗体的进一步临床应用打下了坚实基础。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-10
1 引言  10-22
  1.1 卵黄抗体的研究背景  10-11
  1.2 卵黄抗体的产生机理  11
  1.3 卵黄抗体的作用机理  11-13
  1.4 卵黄抗体的生物学特性  13-14
    1.4.1 卵黄抗体的结构及免疫学特性  13-14
    1.4.2 卵黄抗体的稳定性  14
  1.5 卵黄抗体高免蛋的制备  14-16
    1.5.1 产蛋鸡的饲养  14-15
    1.5.2 蛋鸡的免疫  15-16
  1.6 卵黄抗体的分离提取纯化方法  16-18
    1.6.1 卵黄抗体的主要分离方法  16-17
    1.6.2 卵黄抗体的主要提取方法  17-18
    1.6.3 卵黄抗体的主要纯化方法  18
  1.7 卵黄抗体的应用及应用前景  18-20
    1.7.1 应用卵黄抗体防治疾病  18-20
    1.7.2 应用卵黄抗体制备诊断试剂  20
    1.7.3 应用卵黄抗体作为饲料添加剂  20
  1.8 卵黄抗体的应用特点  20-21
  1.9 立题背景和意义  21-22
2 材料与方法  22-34
  2.1 试验材料  22-24
    2.1.1 主要试剂  22
    2.1.2 试验所用药物  22
    2.1.3 主要仪器  22-23
    2.1.4 毒种  23
    2.1.5 部分试剂的配制  23-24
    2.1.6 实验动物  24
  2.2 试验方法  24-34
    2.2.1 蛋鸡免疫程序的建立  24-26
    2.2.2 抗鸡传染性法氏囊病毒卵黄抗体去脂试验  26-29
    2.2.3 IgY 的稳定性研究  29-30
    2.2.4 抗鸡传染性法氏囊病毒卵黄抗体的动物保护试验  30-34
3 结果  34-49
  3.1 蛋鸡免疫程序的建立  34-36
    3.1.1 IBDV 组织灭活苗检验结果  34
    3.1.2 AGP 法检测不同免疫原免疫蛋鸡血清和卵黄抗体效价变化情况  34-36
  3.2 抗鸡传染性法氏囊病毒卵黄抗体去脂试验结果  36-43
    3.2.1 聚乙二醇法去脂试验结果  36-37
    3.2.2 泊洛沙姆法去脂试验结果  37-38
    3.2.3 水稀释法去脂试验结果  38-39
    3.2.4 水-辛酸法去脂试验结果  39-40
    3.2.5 四种卵黄抗体去脂方法比较结果  40-42
    3.2.6 卵黄抗体的灭活试验结果  42-43
    3.2.7 卵黄抗体保存试验结果  43
  3.3 IgY 的稳定性研究结果  43-45
    3.3.1 保存温度对IgY 抗体滴度的影响  44
    3.3.2 IgY 抗体耐酸试验结果  44-45
    3.3.3 IgY 抗体热稳定试验结果  45
    3.3.4 胰酶消化试验结果  45
  3.4 抗鸡传染性法氏囊病毒卵黄抗体的动物保护试验结果  45-49
    3.4.1 卵黄抗体无菌检验，支原体检验，外源性病毒检验，白血病病毒检验结果  45-46
    3.4.2 卵黄抗体安全检验结果  46
    3.4.3 卵黄抗体液攻毒动物保护试验结果  46-49
4 讨论  49-54
  4.1 关于蛋鸡免疫程序的建立  49
  4.2 关于抗鸡传染性法氏囊病毒卵黄抗体去脂试验  49-51
  4.3 关于IgY 的稳定性研究  51-52
  4.4 关于抗鸡传染性法氏囊病毒卵黄抗体的应用  52-54
5 结论  54-55
参考文献  55-60
在读期间发表的学术论文  60-61
作者简历  61-62
致谢  62-63

抗禽传染性法氏囊病毒卵黄抗体的研制及应用

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