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奶牛血液红细胞抗菌肽的分离与纯化

作　者: 宋涛
导　师: 胡建和
学　校: 河南科技学院
专　业: 预防兽医学
关键词: 抗菌肽 牛血液 离子交换层析 反相高效液相色谱层析 琼脂扩散
分类号: S823
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 63次
引　用: 1次
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内容摘要


近来,我国养牛业受金融危机的影响,正处于低谷时期,但据中国畜牧业协会最新统计显示。2009年上半年,全国牛存栏和出栏数分别为16,683万头和8,035万头,仍居世界前列。由屠宰肉牛而产生的副产物牛血接近百万吨,就目前而言,我国利用的牛血资源还是比较少和单调的,除了一小部分加工成饲料添加剂和生物制剂外,大部分都当做废物遗弃,既污染了资源又浪费了宝贵的蛋白质资源,而与我们相邻的发达国家之一日本对牛血资源的利用率约在50%左右。他们主要是开发肽类试剂、肽类药物以及功能食品和食品添加剂。本试验采取离子交换层析和反相高效液相色潽法对臦褐械目咕慕写炕徊?对纯化的条件进行探索。采用琼脂扩散试验对抗菌肽的活性进行鉴定。采用质谱分析法对血液中的抗菌肽的进行分子量的检测,并初步检测出肽的序列。1L新鲜牛血液经过处理后得到红细胞和白细胞抗菌肽粗提物分别是76.37克和1.21g。30mL的牛血液红细胞抗菌肽粗提物经过离子交换层析纯化后得到7.82g粉状纯化物。经过反相高效液相色潽纯化和活性检测后，得到一段具有活性的纯化峰段，为纯化物进行分子量和分子结构的确定奠定了基础;试验证实,在牛血液红细胞中确实存在着天然的具有抗菌活性的多肽。本试验采用溶胀的方法将牛血液中红细胞与白细胞进行分离,然后进一步粗提蛋白,通过等度洗脱的离子交换层析法将红细胞抗菌肽粗提物纯化,再运用梯度洗脱反相高效液相色潽法将样品进一步的纯化志钚允匝榻峁砻鞫嚯亩杂诟锢际弦跣跃?革兰氏阳性菌具有一定的抑制作用,有些对真菌具有抑制作用。奶牛血液红细胞抗菌肽的初步分离和鉴定,为抗菌肽的进一步开发提供了依据,为牛源抗菌肽的进一步理论研究及实际应用于兽药领域提供了基础。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-10
第一章 文献综述  10-28
  1 研究背景  10-12
  2 抗菌肽的理化性质  12
  3 抗菌肽的结构  12-14
    3.1 α-螺旋型抗菌肽  13
    3.2 β-折叠型和环形抗菌肽  13
    3.3 伸展性结构的抗菌肽  13-14
  4 抗菌肽的生物活性  14-17
    4.1 抗细菌、抗真菌活性  15
    4.2 抗病毒活性  15-16
    4.3 抗肿瘤活性  16
    4.4 促进伤口愈合  16
    4.5 抗菌肽的免疫调节活性  16-17
  5 抗菌肽的分类  17-19
    5.1 微生物肽  17
    5.2 植物抗菌肽  17-18
    5.3 动物抗菌肽  18-19
  6 抗菌肽的抗菌原理  19-21
    6.1 抗菌肽抗细菌作用机制  19-21
    6.2 抗真菌机理  21
    6.3 抗病毒机理  21
    6.4 抗肿瘤机理  21
  7 抗菌肽的研究进展  21-24
  8 天然抗菌肽的提取与分离  24-26
  9 研究目的和意义  26
  10 研究技术路线  26-28
第二章 实验内容  28-42
  1 实验材料  28-33
    1.1 血液及菌株  28
    1.2 牛血液抗菌肽粗提物主要试剂的配制  28-29
    1.3 牛血液抗菌肽粗提物主要使用仪器  29
    1.4 离子交换层析主要试剂的配置  29-30
    1.5 离子交换层析主要使用仪器  30
    1.6 反相高压液相色谱分析主要试剂的配置  30-31
    1.7 反相高压液相色谱分析主要仪器  31
    1.8 牛血液抗菌肽的活性检测  31-33
  2 实验方法  33-42
    2.1 牛血液抗菌肽粗提物的制备  33-34
    2.2 红细胞抗菌肽粗提物的活性检测  34-36
    2.3 离子交换层析  36-37
    2.4 离子交换层析纯化后样品活性检测  37-38
    2.5 反相高效液相色潽法  38-39
    2.6 色谱分离样品活性检测  39-42
第三章 结果与分析  42-56
  1 抗菌肽粗提物收集量及活性检测  42-44
    1.1 抗菌肽粗提物收集结果  42
    1.2 细胞的分离方法  42
    1.3 粗提物抗菌活性鉴定结果  42-44
    1.4 分析  44
  2 离子交换层析纯化与活性检测  44-49
    2.1 纯化物收集量  44
    2.2 峰与馏分的收集  44-46
    2.3 活性检测结果  46-48
    2.4 讨论  48-49
  3 反相高效液相色谱分析结果与讨论  49-56
    3.1 梯度色谱峰的收集  49-50
    3.2　纯化物的收集  50-51
    3.3 活性检测结果  51-52
    3.4 等度洗脱峰的收集  52-53
    3.5 活性检测结果  53
    3.6 讨论  53-56
第四章 结论  56-58
参考文献  58-64
致谢  64-66
缩略语表  66-68
攻读学位期间取得的研究成果目录  68

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 牛
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