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培育聚合抗褐飞虱基因bph21（t）和抗稻瘟病基因Pi9保持系中间材料的研究

作　者: 王耀雯
导　师: 刘丕庆
学　校: 广西大学
专　业: 作物遗传育种
关键词: 水稻褐飞虱稻瘟病分子标记基因聚合
分类号: S511
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

水稻(Oryza sativa L.)是我国和世界主要的粮食作物之一,在全球粮食生产和消费中占有十分重要的地位。稻褐飞虱和稻瘟病是危害水稻生产的主要病虫害。实践证明,选育和利用抗病虫品种是控制水稻病虫害发生的最经济、环保和有效的途径。本实验是以具有优良农艺性状的保持系博ⅢB作为轮回亲本,以含抗褐飞虱基因bph21(t)的BPH 54和含抗稻瘟病基因Pi9的材料681为供体亲本,结合了传统育种方法和分子标记辅助选择技术。通过紧密连锁的分子标记,并结合传统鉴定方法,对目的基因bph21(t)和Pi9进行检测。获得以下结果：1、通过传统育种方法结合分子标记手段,将抗褐飞虱基因和抗稻瘟病基因聚合在博ⅢB中,并在BC1F1’与BC3F1杂交后代中获得具有双抗基因的植株,获得了具有两个新基因的保持系中间材料。2、从多个分子标记中筛选出在亲本材料中具有多态性的RM5348,可用于对抗褐飞虱基因bph21(t)的跟踪检测。3、通过鉴定,含有抗褐飞虱基因的材料的抗虫性明显高于感虫对照材料。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-10
1 前言  10-25
  1.1 研究背景及意义  10-11
  1.2 水稻抗褐飞虱基因的研究进展  11-19
    1.2.1 褐飞虱概述  11-12
    1.2.2 褐飞虱的生物型  12-14
    1.2.3 水稻抗褐飞虱的机制及其生化基础  14-16
    1.2.4 褐飞虱抗性基因的研究进展  16-19
  1.3 水稻抗稻瘟病基因的研究进展  19-24
    1.3.1 水稻抗瘟性的分类  19
    1.3.2 水稻与稻瘟病的互作机制  19-20
    1.3.3 水稻抗稻瘟病基因的定位与应用  20-24
  1.4 分子标记辅助育种技术  24-25
    1.4.1 分子标记  25
    1.4.2 分子标记辅助选择  25
2 材料与方法  25-38
  2.1 水稻材料、褐飞虱虫源以及稻瘟病菌  25-27
    2.1.1 供体亲本材料  25-26
    2.1.2 受体亲本材料  26
    2.1.3 抗虫对照材料  26
    2.1.4 感虫对照材料  26
    2.1.5 抗病对照材料  26
    2.1.6 感病对照材料  26
    2.1.7 褐飞虱虫源  26
    2.1.8 稻瘟病菌菌系  26-27
  2.2 稻褐飞虱的人工饲养及鉴定评级方法  27-29
    2.2.1 稻褐飞虱的饲养  27
    2.2.2 水稻抗褐飞虱鉴定方法  27-29
  2.3 稻瘟病菌的培养与接种  29-30
    2.3.1 稻瘟病菌的培养基  29
    2.3.2 稻瘟病菌的培养方法  29
    2.3.3 水稻抗稻瘟病菌的鉴定方法  29-30
  2.4 水稻杂交方法  30-31
  2.5 分子标记检测  31-37
    2.5.1 生化试剂及配制  31-32
    2.5.2 实验设备  32
    2.5.3 水稻基因组DNA的提取方法  32-33
    2.5.4 水稻基因组DNA的检测  33
    2.5.5 PCR反应体系的建立  33-35
    2.5.6 PCR产物的电泳检测  35-37
  2.6 聚合技术路线  37-38
    2.6.1 技术路线  37
    2.6.2 田间种植  37-38
3 结果与分析  38-52
  3.1 稻褐飞虱与稻瘟病菌的接种鉴定  38-41
    3.1.1 稻褐飞虱的接虫鉴定  38-40
    3.1.2 稻瘟病菌的接种鉴定  40-41
  3.2 提取DNA的检测  41-42
  3.3 分子标记亲本多态性检测  42-47
    3.3.1 分子标记RM5348对bph21(t)基因在亲本中多态性的检测  42-43
    3.3.2 分子标记pB8对Pi9基因在亲本中多态性的检测  43-44
    3.3.3 分子标记RM540对bph20(t)基因在亲本中多态性的检测  44-45
    3.3.4 分子标记BYL-7对bph20(t)基因在亲本中多态性的检测  45-46
    3.3.5 分子标记RM222对bph21(t)基因在亲本中多态性的检测  46-47
  3.4 对抗褐飞虱基因bph21(t)在各世代中的分子标记检测  47-50
    3.4.1 分子标记RM5348对bph21(t)基因在BC1F1中的检测  47-48
    3.4.2 分子标记RM5348对bph21(t)基因在BC3F1中的检测  48-49
    3.4.3 分子标记RM5348对bph21(t)基因在BC4F1和BC1F1’与BC3F1杂交后代中的检测  49-50
  3.5 对抗稻瘟病基因Pi9在各世代中的分子标记检测  50-52
    3.5.1 分子标记pB8对Pi9基因在BC1F1’中的检测  50-51
    3.5.2 分子标记pB8对Pi9基因在BC1F1’与BC3F1杂交后代中的检测  51-52
4 讨论  52-56
  4.1 分子标记实验的影响因素  52-54
    4.1.1 水稻基因组DNA的提取  52-53
    4.1.2 DNA的保存  53
    4.1.3 影响PCR实验的因素  53-54
  4.2 水稻的杂交  54
  4.3 DNA指纹技术  54-55
  4.4 抗褐飞虱基因bph21(t)和抗稻瘟病基因Pi9的分子标记辅助育种  55-56
5 结论  56-57
  5.1 获得含两个抗性基因的中间材料  56
  5.2 抗稻飞虱的分子标记  56-57
参考文献  57-63
致谢  63

培育聚合抗褐飞虱基因bph21（t）和抗稻瘟病基因Pi9保持系中间材料的研究

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