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IFN-α2a-NGR的肿瘤细胞敏感性研究

作　者: 黄启超
导　师: 颜真
学　校: 第四军医大学
专　业: 生化与分子生物学
关键词: 干扰素 IFN-α2a-NGR 肿瘤信号转导
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 25次
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内容摘要

干扰素-α2a(IFN-α2a)是一种具有抗病毒、抗细胞增殖和调节免疫应答作用的细胞因子,已用于病毒性疾病和肿瘤等的治疗。然而,临床应用发现,体内有多种肿瘤对IFN-α2a治疗并不敏感,治疗所需剂量大,可导致明显毒副作用,限制其在临床的广泛应用。前期研究中,为了进一步提高IFN-α2a的抗肿瘤活性,增加其抗实体瘤的可能性,同时降低毒副作用,减少用药量,我校生物技术中心应用生物工程技术将能与肿瘤新生血管内皮细胞CD13(又称氨肽酶N, aminopeptidase N, APN)特异结合的多肽NGR肽融合在IFN-α2a的羧基端,在大肠杆菌中表达了融合蛋白IFN-α2a-NGR。体内动物实验显示荷瘤小鼠尾静脉注射IFN-α2a-NGR后,药物在肿瘤组织的血管及周围组织明显富集,由此造成抑瘤作用亦明显强于IFN-α2a,达到相同疗效时融合蛋白的用药量约为普通干扰素的1/3;急性和长期毒性实验均表明融合蛋白不引发明显的毒副作用,安全性与普通干扰素一致。但在前期研究中我们仍然发现并非所有肿瘤细胞均对IFN-α2a-NGR敏感,并发现细胞表面干扰素受体(interferon receptor ,IFNAR)表达水平的高低与该细胞对干扰素应答的敏感性相关。为了进一步探索导向干扰素IFN-α2a-NGR抗肿瘤的作用及分子机制,阐明影响肿瘤细胞对IFN-α2a-NGR应答的关键信号分子,寻求逆转肿瘤细胞株对IFN-α2a-NGR的敏感性的方法,我们在前期实验的基础上,以干扰素受体高表达的人肺腺癌A549细胞和IFNAR低表达的人胃癌MKN-45细胞为模型,在细胞水平分析了导向性干扰素IFN-α2a-NGR的抗肿瘤效应,为其进一步的研发奠定基础。在本课题中我们通过培养细胞株A549和MKN-45,应用MTT检测、流式细胞术(FCM)、Western blot以及合成siRNA靶向干涉通路中的信号分子,证实了导向干扰素IFN-α2a-NGR与普通干扰素IFN-α2a在细胞和分子水平的效应基本一致,即主要通过JAK/STAT信号途径的激活发挥抑制细胞增殖的功能。但在干扰素IFN-α2a-NGR刺激后,细胞株A549和MKN-45胞内分子表达变化存在明显差异, A549细胞中,p-STAT1、p53、OAS与SOCS1表达上调; MKN-45中p53、OAS无显著变化, SOCS1显著上调。通过靶向干涉SOCS1,可提高MKN-45细胞对IFN-α2a-NGR的敏感性。本研究部分揭示了IFN-α2a-NGR抑制肿瘤细胞增殖的分子机制,并初步证实p-STAT1、p53与SOCS1的表达与活化可影响细胞对IFN-α2a-NGR的敏感性,为建立IFN-α2a-NGR敏感肿瘤的快速评价方法,探索提高肿瘤细胞对IFN-α2a-NGR治疗敏感性的途径和方法,以及IFN-α2a-NGR的进一步研发奠定了基础。

全文目录

缩略语表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-12
前言  12-14
文献回顾  14-26
正文  26-49
  实验一不同肿瘤细胞株IFN-α2a-NGR信号同路的研究  26-39
    1 材料  26-29
    2 方法  29-32
    3 结果  32-37
    4 讨论  37-39
  实验二用 siRNA 技术干涉 SOCS1 基因的表达提高肿瘤细胞敏感性  39-49
    1 材料  39-41
    2 方法  41-45
    3 结果  45-47
    4 讨论  47-49
小结  49-50
参考文献  50-55
个人简历和研究成果  55-56
致谢  56

IFN-α2a-NGR的肿瘤细胞敏感性研究

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