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小型化Spreeta SPR免疫传感器在大肠杆菌O157：H7检测中的研究

作　者: 斯城燕
导　师: 王剑平；叶尊忠
学　校: 浙江大学
专　业:
关键词: SPR免疫传感器小型化大肠杆菌0157:H7 检测细胞裂解
分类号: R155.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

大肠杆菌0157:H7(E. coli 0157:H7)作为危害最大的食源性致病菌之一,在我国存在流行暴发的可能性和感染的严重性。由于传统检测方法存在操作繁琐、费力、耗时等缺点,因此急需研制一种快速准确的检测方法。本课题调查了目前国际上诸多新型检测技术,包括生物传感器。根据Spreeta SPR传感器的优势,最终将Spreeta SPR传感器与细胞裂解法作为主要研究手段与内容,实现对大肠杆菌O157：H7的检测,并对其进行了较为深入的探讨和研究。本课题的主要研究内容和研究结果如下：(1)用不同浓度葡萄糖溶液评估Spreeta SPR传感器性能,葡萄糖浓度与折射率间的相关系数接近1,用去离子水冲洗后回复基线,得出该传感器性能良好。(2)通过亲和素及生物素标记抗体的响应结果的重复性实验可知该传感器重复性高,为Spreeta SPR免疫传感器用于检测大肠杆菌O157：H7提供了理论基础,其检测限为3×106 cfu mL-1,基本满足检测需求。(3)比较BIACORE SPR免疫传感器,用直接法检测大肠杆菌O157：H7的检测限为3×105 cfu mL-1,检测灵敏度与酶联免疫吸附法(ELISA)的灵敏度相当,Spreeta SPR免疫传感器的灵敏度有待提高。(4)研究选用细胞裂解技术与Spreeta SPR免疫传感器结合来降低检测限,样品菌液超声处理后,检测限下降为3×104 cfu mL-1,相关系数为0.98。结果表明细胞裂解技术能有效降低传感器的检测限。(5)采用大肠杆菌DH 5α和李斯特菌作为验证菌检验传感器对大肠杆菌0157：H7的特异性,得出传感器对目标菌的特异性良好,对验证菌的吸附很小。

全文目录

致谢  8-9
摘要  9-10
Abstract  10-11
1 绪论  11-25
  1.1 大肠杆菌O157:H7及其国内外检测方法研究进展  11-19
    1.1.1 生物学特性  11-12
    1.1.2 流行病学  12-13
    1.1.3 致病性与临床表现  13-14
    1.1.4 国内外检测方法研究进展  14-19
  1.2 生物传感器  19-21
    1.2.1 概述  19-20
    1.2.2 生物传感器在微生物检测中的应用  20-21
  1.3 本文研究目标和研究内容  21-24
    1.3.1 研究的目的和意义  21-22
    1.3.2 研究内容和路线  22-24
  本章小结  24-25
2 SPR免疫生物传感器原理与现状  25-37
  2.1 免疫学原理  25-26
    2.1.1 抗原  25
    2.1.2 抗体  25
    2.1.3 免疫反应  25-26
  2.2 SPR免疫传感器概述  26-28
  2.3 应用领域  28-30
  2.4 抗体固定方法及其研究进展  30-34
  2.5 提高SPR免疫传感器灵敏度方法  34-36
  本章小结  36-37
3 实验材料与方法  37-43
  3.1 主要试剂  37-38
  3.2 主要实验仪器及器材  38-39
  3.3 SPR传感器芯片  39
  3.4 主要溶液及试剂配制  39-40
  3.5 实验方法  40-42
    3.5.1 细菌的培养与平板计数  41
    3.5.2 样品制备  41
    3.5.3 Spreeta芯片清洗  41
    3.5.4 Spreeta SPR传感器性能评估  41
    3.5.5 生物分子固定稳定性试验  41
    3.5.6 Spreeta SPR传感器检测方法  41-42
    3.5.7 BIACORE SPR传感器检测方法  42
    3.5.8 ELISA检测方法  42
    3.5.9 Spreeta SPR传感器特异性验证  42
  本章小结  42-43
4 SPR传感器检测大肠杆菌O157:H7的结果与讨论  43-55
  4.1 Spreeta SPR传感器检测法  43-48
    4.1.1 Spreeta芯片清洗  43
    4.1.2 Spreeta SPR传感器性能评估  43-44
    4.1.3 亲和素与抗体固定的稳定性试验  44-45
    4.1.4 传感器的制作与表征  45-46
    4.1.5 响应曲线  46
    4.1.6 标准曲线  46-48
    4.1.7 传感器的检测限  48
    4.1.8 芯片的清洗  48
  4.2 BIACORE SPR传感器检测法  48-52
    4.2.1 传感器的制作与表征  49
    4.2.2 抗体浓度选择  49-50
    4.2.3 大肠杆菌O157:H7响应曲线  50-52
    4.2.4 芯片再生  52
  4.3 ELISA实验  52-53
  4.4 传感器特异性验证  53-54
  本章小结  54-55
5 结论与展望  55-58
  5.1 结论  55-56
  5.2 存在的问题及今后研究设想  56-57
  本章小结  57-58
参考文献  58-65
作者简介  65

小型化Spreeta SPR免疫传感器在大肠杆菌O157：H7检测中的研究

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