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Kupffer细胞通过表达IDO诱导大鼠移植肝脏产生免疫耐受

作　者: 廖汪洋
导　师: 龚建平
学　校: 重庆医科大学
专　业: 外科学
关键词: 肝移植 Kupffer细胞吲哚胺2，3双加氧化酶免疫耐受
分类号: R657.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 26次
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内容摘要

目的检测大鼠肝移植自发免疫耐受模型移植后肝脏kupffer细胞(Kupffer Cells, KCs)中吲哚胺2,3双加氧化酶(Indoleamine 2,3-dioxygenase, IDO)基因和蛋白的表达情况,探讨其与肝移植术后自发免疫耐受形成的关系。方法(1)采用改良的Kamada’‘二袖套法”建立免疫耐受(BN→Lewis)和急性排斥(Lewis→BN)大鼠肝移植动物模型。观察术后30天内大鼠存活和生存情况,并于1、3、5、7天分别活杀5只取外周血及肝脏组织标本。光镜观察肝脏组织形态学改变；全自动生化分析仪检测外周血浆丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)、天冬氨酸转移酶(aspartate aminotransferase, AST)和总胆红素(total bilirubin,TBIL);免疫组织化学检测IDO在两种动物模型移植肝脏中的表达情况。(2)分别于肝移植术后1、3、5、7天分离两组模型移植肝脏中的KCs,实时—聚合酶链式反应(Real time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测KCs中IDO基因和蛋白的表达情况。各组间均数的比较采用均数±标准差(x±sd)表示；用SPSS13.0软件进行方差分析；量的统计学方法采用t检验,率的统计采用x2检验,P<0.05表示差异有显著性。结果：(1)采用改良的Kamada’‘二袖套法”成功建立稳定的大鼠原位肝移植动物模型。发现Lewis→BN模型的大鼠肝移植术后3天开始出现急性排斥反应的病理表现(依据Banff标准),术后第5至7天比较典型,所有受体大鼠于13天内全部死亡；而BN→Lewis模型的大鼠肝移植后一直未见明显的急性排斥反应表现,30天内无一例死亡,可长期存活。(2)Lewis→BN组大鼠术后血浆ALT.AST和TBIL呈现进行性升高,到第7天时分别已达分别达到963.43±64.21U/L,742.46±52.71U/L,88.72±13.04μmol/L,而BN→Lewis组在术后短期升高后逐渐降至正常范围,两组差异明显(P<0.05)。(3)免疫组织化学结果显示：术后第1天IDO在两组移植肝脏中表达很少；术后第3天在BN→Lewis组IDO表达明显增强,第5、7天IDO继续呈强阳性表达,范围逐渐扩大；在Lewis→BN组IDO表达始终较弱,两组比较有明显差异(P<0.05)。(4)术后第一天两组模型的移植肝脏KCs中IDO的mRNA和蛋白表达水平无明显差异(P>0.05)；但在术后第3天,自发免疫耐受组移植肝脏KCs中IDO的mRNA(0.091±0.009)和蛋白水平(0.227±0.013)开始显著升高,一直到第7天(分别为0.164±0.024和0.750±0.021)都持续呈高水平表达；而急性排斥模型移植肝脏KCs中IDOmRNA和蛋白水平在术后第5天(分别为0.086±0.013和0.325±0.016)达到高峰,但是一直处于低水平表达。在术后第3、5、7天,自发耐受模型移植肝脏KCs中IDOmRNA和蛋白的表达水平均明显高于急性排斥模型,两组之间有明显差异(P<0.05)。结论：(1)IDO在自发免疫耐受组移植肝脏中的表达明显高于急性排斥组；(2)自发免疫耐受组移植肝脏中KCs中IDO的表达水平也明显高于相应时间点急性排斥模型的表达水平。提示高表达IDO的KCs可能在肝移植术后的免疫耐受的诱导和维持方面具有重要作用。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
中文摘要  7-10
英文摘要  10-13
前言  13-15
1 实验材料  15-18
2 实验方法和步骤  18-31
3 实验结果  31-38
4 讨论  38-46
全文结论  46-47
参考文献  47-54
附图  54-61
文献综述一  61-72
文献综述二  72-86
致谢  86-87
攻读硕士学位期间发表的学术论文  87
攻读硕士学位期间参加的课题  87

Kupffer细胞通过表达IDO诱导大鼠移植肝脏产生免疫耐受

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