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药用植物夹竹桃叶活性成分研究

作　者: 赵闯营
导　师: 谢丽玲
学　校: 汕头大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 夹竹桃叶多糖糖蛋白提取分离纯化
分类号: S567.19
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本文对夹竹桃叶的主要成分进行了分析,研究了夹竹桃叶多糖和糖蛋白的提取工艺,对多糖和糖蛋白进一步分离纯化得到纯品后,进行了多糖的结构、单糖的组成及糖蛋白的等电点、分子量的研究。结果表明,夹竹桃叶鲜样中水分含量约为65.11%,干燥后样品中主要物质含量分别为粗纤维36.05%、糖类9.65%、总蛋白7.26%,总灰分6.32%、多糖6.96%、粗脂肪3.25%、还原糖2.69%,其它27.82%。在单因素实验基础上,根据Box-Benhnken的中心组合实验设计原理采用三因素三水平的响应面分析法,对夹竹桃叶多糖的提取工艺进行了优化。依据回归分析确定各工艺条件的主要影响因素,得到最优工艺条件为提取温度88.2℃,提取时间3.0h,料液比1:45,提取两次多糖得率可达6.73%。通过乙醇沉淀,除蛋白,脱色,柱层析分离,光谱分析及薄层层析等方法对夹竹桃叶多糖进行分析。结果表明,醇沉、除蛋白、脱色的最佳工艺条件为:4倍无水乙醇沉淀8h,TCA法除蛋白,大孔树脂AB-8脱色。透析后的多糖经DEAE-cellulose 52纤维素柱层析和Sephadex G-200柱层析分离纯化,表明该多糖为均一组分多糖。经分离纯化后的精多糖几乎不含游离蛋白和核酸类物质,且以β-糖苷型吡喃糖为主,单糖组成中含有葡萄糖,可能含有阿拉伯糖、岩藻糖和果糖。夹竹桃叶糖蛋白提取工艺优化是在Plackett-Burman实验和最陡爬坡实验基础上,根据Box-Benhnken的中心组合实验原理采用三因素三水平的响应面分析法,得到最优提取条件为料液比1:18.5;盐浓度0.03;pH 8.4,在此条件提取一次后夹竹桃叶糖蛋白量可达3.424mg/g。硫酸铵沉淀,透析后的夹竹桃叶糖蛋白,经DEAE-cellulose 52离子交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤层析分离纯化后,得到一个组分较为单一的糖蛋白,该糖蛋白等电点为pH5.9,经SDS-PAGE分析,结果表明,该糖蛋白电泳后有三条条带,分子量约为53kD,29kD和26kD。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-6
缩略语  6-10
前言  10-24
  1 夹竹桃研究进展  10-13
    1.1 夹竹桃的生物学特性  10-11
    1.2 夹竹桃的生物学功能  11-12
    1.3 夹竹桃的药理作用  12-13
  2 药用植物多糖研究进展  13-16
    2.1 多糖的提取工艺研究  14
    2.2 多糖除杂工艺研究  14
    2.3 多糖的分离纯化研究  14
    2.4 多糖的结构研究  14-15
    2.5 多糖的生物活性研究  15-16
  3 药用植物糖蛋白研究进展  16-18
    3.1 糖蛋白的提取研究  16-17
    3.2 糖蛋白的分离纯化研究  17
    3.3 糖蛋白的生物学功能  17-18
  4 本文研究的意义和内容  18-19
    4.1 本文研究的意义  18
    4.2 本文研究的主要内容  18-19
  参考文献  19-24
第一章药用植物夹竹桃叶成分分析  24-31
  1 材料与仪器  24
    1.1 材料及试剂  24
    1.2 主要仪器及设备  24
  2 实验方法  24-27
    2.1 水分的测定  24
    2.2 蛋白含量的测定  24-25
    2.3 粗脂肪含量的测定  25
    2.4 总灰分的测定  25-26
    2.5 粗纤维的测定  26
    2.6 总糖含量的测定  26
    2.7 还原糖含量测定  26-27
  3 结果与分析  27-29
    3.1 总糖的标准曲线及方程  27-28
    3.2 还原糖的标准曲线及方程  28
    3.3 夹竹桃叶干品各组分含量分析  28-29
    3.4 夹竹桃叶鲜样中各指标含量  29
  4 讨论  29-30
  参考文献  30-31
第二章响应面分析法优化夹竹桃叶多糖的提取工艺  31-38
  1 材料与仪器  31
    1.1 材料及试剂  31
    1.2 主要仪器及设备  31
  2 实验方法  31
  3 结果与分析  31-37
    3.1 单因素对夹竹桃叶多糖得率的影响  31-33
    3.2 响应面分析法优化夹竹桃叶多糖的提取条件  33-36
    3.3 验证实验  36-37
  4 讨论  37
  参考文献  37-38
第三章夹竹桃叶多糖的分离纯化及结构分析  38-50
  1 材料与仪器  38
    1.1 材料  38
    1.2 仪器与试剂  38
  2 实验方法  38-41
    2.1 多糖含量和蛋白含量的测定  38
    2.2 多糖的提取  38
    2.3 乙醇沉淀工艺条件的确定  38-39
    2.4 多糖中蛋白的去除  39
    2.5 多糖液中色素的脱除  39-40
    2.6 多糖液的透析  40
    2.7 多糖液的柱层析分离纯化  40
    2.8 夹竹桃叶多糖的光谱分析  40
    2.9 夹竹桃叶多糖的单糖组成分析  40-41
  3 结果与分析  41-48
    3.1 乙醇沉淀工艺的确定  41-42
    3.2 蛋白的去除  42-43
    3.3 色素的脱除  43
    3.4 柱层析分离纯化  43-45
    3.5 光谱分析  45-47
    3.6 夹竹桃叶多糖的单糖组成分析  47-48
  4 讨论  48-49
  参考文献  49-50
第四章夹竹桃叶糖蛋白的提取工艺优化  50-60
  1 材料及仪器  50
    1.1 材料及试剂  50
    1.2 主要仪器及设备  50
  2 实验方法  50-51
    2.1 夹竹桃叶糖蛋白提取工艺流程  50
    2.2 夹竹桃叶糖蛋白的提取优化  50-51
  3 定量分析方法  51-53
    3.1 多糖标准曲线的制作  51-52
    3.2 蛋白标准曲线的制作  52-53
    3.3 夹竹桃叶糖蛋白含量计算  53
  4 结果与分析  53-58
    4.1 浸提液中多糖和蛋白含量一致性分析  53
    4.2 Plackett-Burman 确定主要影响因素实验结果分析  53-54
    4.3 最陡爬坡实验确定最佳因素水平区域结果分析  54
    4.4 响应面分析法确定最佳提取工艺  54-58
  5 讨论  58-59
  参考文献  59-60
第五章夹竹桃叶糖蛋白的分离纯化及性质研究  60-70
  1 材料与仪器  60
    1.1 材料及试剂  60
    1.2 主要仪器及设备  60
  2 实验方法  60-63
    2.1 夹竹桃叶糖蛋白粗提夜的浓缩  60
    2.2 夹竹桃叶糖蛋白等电点的测定  60-61
    2.3 夹竹桃叶糖蛋白的硫酸铵分级沉淀  61
    2.4 夹竹桃叶糖蛋白的透析  61
    2.5 夹竹桃叶糖蛋白的柱层析分离纯化  61-62
    2.6 夹竹桃叶糖蛋白糖肽键性质分析  62
    2.7 夹竹桃叶糖蛋白SDS-PAGE 分析  62-63
  3 结果与分析  63-67
    3.1 夹竹桃叶糖蛋白等电点测定  63
    3.2 夹竹桃叶糖蛋白的硫酸铵分级沉淀  63-64
    3.3 DEAE-Cellulose 52 离子交换层析  64
    3.4 Sephadex G-200 凝胶过滤层析  64-65
    3.5 夹竹桃叶糖蛋白糖肽键性质分析  65-66
    3.6 夹竹桃叶糖蛋白SDS-PAGE 分析  66-67
  4 讨论  67-68
  参考文献  68-70
结论与展望  70-71
附录  71-72
致谢  72

药用植物夹竹桃叶活性成分研究

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