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晋、鲁、豫三省鸡杆菌感染情况调查及RAPD分型方法的建立与应用

作　者: 付仁一
导　师: 陈陆；王川庆
学　校: 河南农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 鸡杆菌血清分型 RAPD 分子分型进化分析流行病学调查
分类号: S858.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 18次
引　用: 3次
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内容摘要

鸡输卵管囊肿是困扰我国蛋鸡生产的重要疾病之一。该病主要侵害产蛋鸡群的呼吸道和生殖道,临床上以母鸡产蛋数量和质量下降、产蛋高峰缺失、蛋壳变形、输卵管炎,并最终因导致输卵管囊肿而表现“企鹅”状大腹鸡为主要特征。鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)与本病的发生有关。利用鸡杆菌微量乳胶凝集试验对我国河南、山东、山西等不同地区86家临床健康蛋鸡场1314份血清样品和河南省12家发病鸡场384份血清样品进行了血清学检测,对鸡杆菌的感染情况进行了调查。结果表明:我国部分地区存在鸡杆菌感染, 86个鸡场鸡杆菌感染率为44.37%(583/1314),鸡杆菌血清Ⅰ型感染率为11.80%(155/1314),Ⅱ型感染率为22.98%(302/1314),Ⅳ型感染率为9.60%(126/1314);12个发病鸡场鸡杆菌感染率为48.4%(186/384),鸡杆菌血清Ⅰ型感染率为4.4% (17/384),Ⅱ型感染率为21.4%(82/384),Ⅳ型感染率为37.5%(144/384)。结果表明:目前该病在我国部分地区已经存在鸡杆菌感染和流行,不同品种和日龄的鸡均可发生,但不同地区鸡杆菌感染率存在显著差异,峪口和青脚麻鸡的血清感染率比良凤花和三黄麻鸡的血清感染率高,开产前蛋鸡的血清感染率低于开产后的血清感染率。以9株鸡杆菌中国分离株为研究对象,根据GenBank上登录的相关序列,针对鸡杆菌三个管家基因rpoB、infB和atpD设计引物并进行PCR扩增、克隆和序列测定分析。扩增出三个管家基因rpoB、infB和atpD基因部分片段,核苷酸序列长度分别为566 bp、531 bp、1441 bp,测序结果已登陆到GenBank。将9株鸡杆菌中国分离株的三个管家基因部分核苷酸序列与已知的鸡杆菌属和巴氏杆菌科其它属相关参考株的相应基因序列比较分析并构建进化树。结果表明:鸡杆菌中国分离株间的核苷酸同源性为98.1%～100%,鸡杆菌中国分离株与国外鸡杆菌分离株间的同源性为89.2～97.1%,鸡杆菌中国分离株与巴氏杆菌科其它属参考株间的同源性为82.1%～83.5%;进化树共形成三大分支,分别为鸡杆菌中国分离株分支、国外鸡杆菌分离株分支和巴氏杆菌科其它属分离株分支。鸡杆菌中国分离株间的亲缘关系较近,国内鸡杆菌与国外鸡杆菌间的亲缘关系较远。对9株鸡杆菌中国分离株进行了血清分型,并应用8条随机引物对该9株鸡杆菌中国分离株和3个参考菌株(1株巴氏杆菌、1株大肠杆菌和1株链球菌)共12株细菌做随机扩增多态性DNA(RAPD)分型研究。结果表明,9株鸡杆菌中国分离株分别属于血清Ⅰ型(1/9)、血清Ⅱ型(3/9)和血清Ⅳ型(5/9)。所用8条随机引物中有3条呈现良好的多态性和稳定性,可产生差异显著的指纹图谱。采用SPSS13.0软件分析了不同菌株间的遗传距离,并依此绘制出菌株间的亲缘关系树状图。12株细菌共分为4个聚类群,其中9株鸡杆菌中国分离株位于同一聚类群中,且又可分为4个聚类亚群。3个参考菌株各自形成一个独立的聚类群。不同血清型的鸡杆菌菌株具有相似的指纹图,同一血清型的菌株指纹图存在差异。RAPD基因分型是目前鸡杆菌分子流行病学调查及病原鉴定的理想方法之一,为进一步进行鸡杆菌的分子流行病学调查打下了良好的基础。

全文目录

致谢  5-8
英文缩写表  8-9
中文摘要  9-11
1 文献综述  11-19
  1.1 鸡输卵管囊肿  11-13
    1.1.1 临床特点及其危害  11-12
    1.1.2 病因学研究概况  12-13
  1.2 鸡杆菌研究进展  13-15
    1.2.1 鸡杆菌的分类研究进展  13-14
    1.2.2 鸡杆菌的致病性研究概况  14-15
  1.3 RAPD标记技术及应用  15-18
    1.3.1 原理  15-16
    1.3.2 RAPD技术的优点  16
    1.3.3 RAPD技术的缺点及对策  16-17
    1.3.4 RAPD标记在遗传分析中的应用  17
    1.3.5 RAPD标记应用前景  17-18
  1.4 小结  18-19
试验研究  19-41
  试验一晋、鲁、豫三省鸡杆菌血清流行病学调查  19-25
    引言  19
    1 材料和方法  19-20
    2 结果  20-23
    3 讨论  23-25
  试验二鸡杆菌中国分离株分子进化分析  25-33
    引言  25
    1 材料与方法  25-26
    2 结果  26-31
    3 讨论  31-33
  试验三鸡杆菌中国分离株RAPD分型方法的建立与应用  33-41
    引言  33
    1 材料与方法  33-36
    2 结果  36-39
    3 讨论  39-41
全文总结  41-42
英文摘要  42-44
参考文献  44-48
附录  48-49

晋、鲁、豫三省鸡杆菌感染情况调查及RAPD分型方法的建立与应用

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