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血红素加氧酶-1对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞抗氧化损伤的研究

作　者: 王洪敏
导　师: 陈淼
学　校: 遵义医学院
专　业: 麻醉学
关键词: 血红素加氧酶-1 肺泡Ⅱ型上皮细胞 氧化损伤 原代培养
分类号: R614
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的：研究血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial typeⅡcell,AEC-Ⅱ)生长的直接影响,并探讨HO-1预处理对AEC-Ⅱ在过氧化氢(hygrogen peroxide,H2O2)造成氧化损伤中的作用。方法：免疫粘附法分离纯化SD大鼠AEC-Ⅱ,台盼蓝(trypan blue)拒染法鉴定细胞活性,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)法鉴定细胞纯度,倒置显微镜和电镜观察细胞的形态学和特征性结构。调节AEC-Ⅱ终浓度至1×106个／ml。①观察HO-1对原代培养AEC-Ⅱ生长的影响。细胞随机分为7组：A组(正常对照组)；B组(H2O2对照组,0.5mmol／L H2O2)；C组(0.01μmol／L HO-1)；D组(0.1μmol／L HO-1)；E组(1μmol／L HO-1)；F组(10μmol／L HO-1)；G组(50μmol／L HO-1)。②观察HO-1预处理对原代培养AEC-Ⅱ氧化损伤的影响。细胞随机分为6组：A组(正常对照组)；B组(H2O2对照组,0.5mmol／L H2O2),C组(0.01μmol／L HO-1+0.5mmol／L H2O2)；D组(0.1μmol／L HO-1+0.5mmol／L H2O2)；E组(1μmol／L HO-1+0.5mmol／L H2O2)；F组(10μmol／L HO-1+0.5mmol／L H2O2)。细胞分别接种于24孔、96孔培养板中,培养24h加入HO-1,26h加入H2O2。培养至29h进行细胞形态学观察、细胞计数和以四甲基偶氮唑盐酶反应比色法(MTT法)测定细胞光密度值(OD值)。结果：①免疫粘附法纯化建立AEC-Ⅱ原代培养的方法可收获细胞2～2.5×107个／鼠,活性和纯度均>90%；电镜下可见AEC-Ⅱ特征性结构-嗜锇性板层小体(lamellar body,Lb)。②培养AEC-Ⅱ至29h,H2O2对照组与正常对照组比较贴壁细胞数量减少,细胞体积减小,胞内可见反光增强的空泡,大量细胞脱壁,上清液中可见较多的细胞碎片。③0.01～50μmol／L HO-1各处理组与正常对照组比较细胞计数、OD值差异无统计学意义(P>0.05),细胞形态无明显改变；与H2O2对照组比较细胞计数、OD值差异有统计学意义(P<0.05)；④0.1～10μmol／L HO-1+0.5mmol／L H2O2组与正常对照组比较细胞计数、OD值差异无统计学意义(P>0.05),细胞形态无明显改变；与H2O2对照组和0.01μmol／L HO-1预处理组比较细胞计数、OD值差异有统计学意义(P＜0.05)；0.01μmol／L HO-1预处理组与H2O2对照组比较细胞计数、OD值差异无统计学意义(P>0.05)。结论：①免疫粘附法纯化建立AEC-Ⅱ原代培养的方法可收获细胞2～2.5×107个／鼠,纯度和活性均>90%；H2O2造成的氧化损伤模型,细胞形态学改变明显,是一种较好的获得AEC-Ⅱ氧化损伤模型的方法；②0.01～50μmol/L HO-1对原代培养的AEC-Ⅱ没有直接的细胞学毒性；③经0.1～10μmol/L HO-1预处理的AEC-Ⅱ在H2O2氧化损伤环境中仍生长良好,提示此浓度的HO-1对离体原代培养大鼠AEC-Ⅱ氧化损伤起保护作用。

全文目录


1 论文  5-29
  1.1 缩略词表  5-6
  1.2 中文摘要  6-8
  1.3 英文摘要  8-10
  1.4 前言  10-11
  1.5 材料与方法  11-16
  1.6 结果  16-19
  1.7 讨论  19-22
  1.8 结论  22-23
  1.9 参考文献  23-26
  1.10 附图  26-29
2 综述  29-40
  2.1 正文  29-35
  2.2 参考文献  35-40
3 致谢  40

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 外科手术学 > 麻醉学
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