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孕酮受体基因、类固醇21—羟化酶基因多态性及其与绵羊产羔数关系

作　者: 查丽莎
导　师: 陈宏权；储明星
学　校: 安徽农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 绵羊 多态性 类固醇21-羟化酶基因 孕酮受体基因 高繁殖力
分类号: S826
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


本论文以孕酮受体(progesterone receptor,PGR)基因和类固醇21-羟化酶(steroid 21-hydroxylase)基因为研究对象,旨在探索这两个基因的多态性与绵羊高繁殖力之间的关系。用于本研究的高繁殖力绵羊羊品种、中等繁殖力绵羊羊品种以及低繁殖力绵羊羊品种分别来自于山东省嘉祥种羊场、浙江省余杭湖羊场和北京高特牧业有限公司种羊场,其中小尾寒羊205只,湖羊49只,多赛特绵羊和特克赛尔绵羊分别40只。利用PCR单链构象多态性(PCR Single-Strand Conformation Polymorphism,PCR-SSCP )分析、限制性内切酶酶切、基因克隆等技术研究这些基因在遗传变异及其对绵羊繁殖性能的影响。结果表明:(1)对于PGR基因,根据牛的孕酮受体基因设计15对引物覆盖该基因全部9个外显子,检测PGR基因在高繁殖力绵羊品种(小尾寒羊)、中等繁殖力品种(湖羊)和低繁殖力品种(多赛特绵羊和特克赛尔绵羊)的单核苷酸多态性,同时研究该基因对绵羊繁殖力的影响。检测结果显示只有引物P9扩增片段具有多态性。对于P9扩增片段,在小尾寒羊、湖羊和多赛特中均检测到AA、AG和GG型,在特克塞尔中只检测到AA和AG型。测序表明GG型与AA型相比在217 bp处有一单碱基突变(A→G),但未引起氨基酸变化。GG型和AG型小尾寒羊产羔数均值分别比AA型的多0.97只(P<0.05)和0.64只(P<0.05),GG型和AG型小尾寒羊产羔数差异不显著(P>0.05)。(2)对于CYP-21基因,针对该基因的10个外显子设计了10对引物中,仅引物P8扩增片段存在多态性。对于P8的扩增片段,HinPⅠ1酶切在小尾寒羊、湖羊和多赛特中检测到AA和AB型,在特克塞尔中只检测到AA型;BcnⅠ酶切在小尾寒羊、湖羊、多赛特和特克塞尔中均检测到CC和CD型。测序分析发现AB型与AA型相比在2340位发生了A→G突变,未引起氨基酸改变;CD型与CC型相比在2376位发生了G→A突变,未引起氨基酸改变。AB型小尾寒羊产羔数最小二乘均值比AA型的多0.96只(P<0.05),CC型和CD型小尾寒羊产羔数差异不显著(P>0.05)。研究结果初步表明PGR基因和CYP21基因皆是提高绵羊产羔数的一个潜在有效的DNA标记。

全文目录


中文摘要  5-6
英文摘要  6-8
略词语表  8-11
研究背景及本研究切入点  11-23
  1 动物经济性状主基因的研究进展  11-12
    1.1 主效基因的效应  11
    1.2 主效基因的测定  11-12
  2 绵羊高繁殖力相关候选基因的研究进展  12-14
    2.1 骨形态发生蛋白15 基因（BMP15）  12-13
    2.2 生长分化因子9 基因（GDF9）  13
    2.3 骨形态发生蛋白受体IB 基因（BMPR-IB）  13-14
    2.4 褪黑激素受体IA 基因（MTNRIA）  14
    2.5 催乳素受体基因（PRLR）  14
  3 孕酮受体基因（PGR）  14-20
    3.1 PGR 基因的研究进展  14-15
    3.2 PGR 基因的结构  15
    3.3 PGR 基因的表达与调控特点  15-16
    3.4 PGR 基因的多态性  16-17
    3.5 PGR 基因与生殖功能的关系  17-20
  4 类固醇21-羟化酶基因（CYP21）  20-22
    4.1 CYP21 基因的研究进展  20
    4.2 CYP21 基因的结构与功能  20
    4.3 CYP21 基因的突变原因  20-21
    4.4 CYP21 基因的多态性  21-22
  5 研究目的及意义  22-23
引言  23-49
  1 材料与方法  24-36
    1.1 实验材料  24-27
      1.1.1 试验绵羊来源及采样方法  24
      1.1.2 菌株、载体  24
      1.1.3 主要试剂  24-25
      1.1.4 主要仪器设备  25
      1.1.5 分析工具软件  25
      1.1.6 溶液试剂配制  25-27
    1.2 实验方法  27-35
      1.2.1 羊血液DNA 的提取  27-28
      1.2.2 DNA 浓度和纯度的检测  28
      1.2.3 引物设计  28-30
      1.2.4 PCR 扩增  30-31
      1.2.5 PCR 结果琼脂糖凝胶电泳检测  31
      1.2.6 利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行SSCP 分析  31-32
      1.2.7 硝酸银染色的步骤  32
      1.2.8 基因型的判定  32
      1.2.9 PGR 基因序列克隆和测序  32-34
      1.2.10 CYP-21 基因PCR 产物的酶切及基因型判定  34-35
    1.3 数据统计分析  35-36
  2. 结果与分析  36-43
    2.1 PGR 基因PCR-SSCP 的结果  36-39
      2.1.1 PGR 基因PCR 扩增结果  36
      2.1.2 PCR-SSCP 多态性检测结果  36-37
      2.1.3 序列分析  37
      2.1.4 PGR 基因在不同绵羊品种中的多态性  37-38
      2.1.5 固定效应对小尾寒羊产羔数的影响  38-39
    2.2 CYP-21 基因PCR-SSCP 及酶切的结果  39-43
      2.2.1 CYP-21 基因PCR 扩增结果  39
      2.2.2 SSCP 检测及序列分析  39-40
      2.2.3 多态位点酶切检测  40-41
      2.2.4 CYP21 基因在不同绵羊品种中的遗传多态性  41
      2.2.5 固定效应对小尾寒羊产羔数的影响  41-43
  3 讨论  43-48
    3.1 关于实验材料的选择  43
    3.2 影响PCR-SSCP 分析的因素  43-45
    3.3 实验结果讨论  45-48
  4 结论  48-49
    4.1 PGR 基因  48
    4.2 CYP21 基因  48-49
参考文献  49-58
致谢  58-59
作者简介  59

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 羊
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