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TLR2mAb和TLR4mAb对DSS诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎干预作用的研究

作　者: 李鹃
导　师: 刘懿；孙旭；陈坚；黄剑平
学　校: 复旦大学
专　业: 内科学
关键词: 溃疡性结肠炎 TLR2 TLR4 TLR2单克隆抗体(TLR2mAb) TLR4单克隆抗体(TLR4mAb) IFN-γ IL-4 IL-17 磷酸化P38αMAPK c-jun c-fos 磷酸化IKK NF-κB 葡聚糖硫酸钠(DSS)
分类号: R574.62
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的探讨TLR2单克隆抗体(Toll like receptor 2 monoantibody, TLR2mAb)和TLR4单克隆抗体(Toll like receptor 4 monoantibody, TLR4mAb)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)的干预作用及其可能机制。方法50只雄性BALB/c小鼠分为A～E组：对照组(A组)、UC模型组(B组)及TLR2mAb干预组(C组)、TLR4mAb干预组(D组)、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组(E组)。A组小鼠饮用蒸馏水7天；B-E组小鼠仅饮用5%DSS水溶液7天以产生急性期溃疡性结肠炎模型。于造模第1、3、5、7天进行干预,C、D、E干预组小鼠分别给予TLR2mAb(10μg)、TLR4mAb(10μg)、TLR2mAb(10μg)+TLR4mAb(10μg)腹腔内注射,A、B组给予腹腔内注射生理盐水,以观察TLR2mAb和TLR4mAb的干预作用。观察指标包括疾病活动指数(disease activity index, DAI)、结肠组织病理学评分(histopathological score, HS)。造模及干预7天后处死小鼠,采用Realtime-PCR法检测各组结肠黏膜TLR2、TLR4、IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达,Western-Blot法检测各组肠粘膜磷酸化p38αMAPK、c-jun、c-fos、磷酸化IKK蛋白表达,EMSA法检测NF-κB的活性变化。结果第一部分TLR2mAb和TLR4mAb对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎症状及病理改变的影响：造模结束时,模型组小鼠产生典型的腹泻、血便、体重减轻等溃疡性结肠炎表现。对照组、模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组的DAI分别为0.50±0.707、9.70±2.406、6.75±3.495、7.75±3.919、5.70±3.498。模型组DAI明显高于对照组(P<0.01); TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组DAI明显低于模型组(P<0.05),且明显高于对照组(P<0.01); TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组DAI与模型组比较无统计学意义(P>0.05)。对照组、模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组的HS分别为6.40±3.273、16.50±2.991、13.25±3.576、14.50±3.625、9.50±3.308。模型组HS明显高于对照组(P<0.01); TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组HS明显低于模型组(P<0.01)和TLR4mAb干预组(P<0.05),与对照组无统计学意义(P>0.05); TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组HS与模型组比较无统计学意义(P>0.05)第二部分TLR2mAb和TLR4mAb对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎肠黏膜细胞因子的影响：对照组、模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组小鼠肠黏膜TLR2mRNA表达量如下：0.26±0.397、1.96±1.558、0.64±1.030、0.39±0.594、0.42±0.461。模型组TLR2mRNA表达明显高于对照组(P<0.01); TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组TLR2mRNA表达明显低于模型组(P<0.05),与对照组无统计学意义(P>0.05)。对照组、模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组小鼠肠黏膜TLR4mRNA表达量如下：0.52±0.414、1.16±0.568、0.45±0.346、0.51±0.374、0.44±0.335。模型组TLR4mRNA表达明显高于对照组(P<0.01); TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组TLR4mRNA表达明显低于模型组(P<0.01,P<0.05,P<0.01),与对照组无统计学意义(P>0.05)。对照组、模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组小鼠肠黏膜IFN-γmRNA表达量如下：0.80±0.802、2.40±1.089、0.95±1.075、0.97±0.716、0.93±0.661。模型组IFN-γmRNA表达明显高于对照组(P<0.01); TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组IFN-γmRNA表达明显低于模型组(P<0.05,P<0.05,P<0.01),与对照组无统计学意义(P>0.05)。对照组、模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组小鼠肠黏膜IL-4mRNA表达量如下：0.12±0.107、0.86±1.185、0.02±0.025、0.02±0.025、0.03±0.024。模型组IL-4mRNA表达明显高于对照组(P<0.05); TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组IL-4mRNA表达明显低于模型组和对照组(P<0.01)。对照组、模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组小鼠肠黏膜IL-17mRNA表达量如下：0.18±0.230、0.61±0.296、0.18±0.236、0.17±0.197、0.06±0.039。模型组IL-17mRNA表达明显高于对照组复旦大学硕士论文(P<0.01)；TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组IL-17mRNA表达明显低于模型组(P<0.01),与对照组无统计学意义(P>0.05)。第三部分TLR2mAb和TLR4mAb对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎TLR2和TLR4共同介导的信号通路的影响：对照组、模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组小鼠肠黏膜磷酸化P38αMAPK蛋白表达量如下：0.45±0.037、1.42±0.131、1.57±0.068、0.89±0.033、0.75±0.024。模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组磷酸化P38αMAPK蛋白表达明显高于对照组(P<0.01)；TLR4mAb干预组、TLR2mAb+TLR4mAb干预组蛋白表达明显低于模型组(P<0.01),TLR2mAb干预组蛋白表达与模型组无明显差异(P>0.05)；TLR2mAb+TLR4mAb干预组蛋白表达与对照组无明显差异(P>0.05)。对照组、模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组小鼠肠黏膜c-jun蛋白表达量如下：0.28±0.060、1.17±0.074、1.00±0.078、0.75±0.183、0.42±0.062。模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组c-jun蛋白表达明显高于对照组(P<0.01); TLR4mAb干预组、TLR2mAb+TLR4mAb干预组蛋白表达明显低于模型组(P<0.01), TLR2mAb干预组蛋白表达与模型组无明显差异(P>0.05)；TLR2mAb+TLR4mAb干预组蛋白表达与对照组无明显差异(P>0.05)。对照组、模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组小鼠肠黏膜c-fos蛋白表达量如下：0.46±0.013、0.48±0.010、0.46±0.017、0.45±0.012、0.45±0.015。组间均无明显差异(P>0.05)。对照组、模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组小鼠肠黏膜磷酸化IKK蛋白表达量如下：0.11±0.022、0.66±0.013、0.34±0.014、0.18±0.010、0.14±0.013。模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组磷酸化IKK蛋白表达明显高于对照组(P<0.01); TLR2mAb、TLR4mAb、TLR2mAb+TLR4mAb干预组蛋白表达明显低于模型组(P< 0.01); TLR4mAb、TLR2mAb+TLR4mAb干预组蛋白表达明显低于TLR2mAb干预组(P<0.01)；TLR2mAb+TLR4mAb干预组蛋白表达与对照组无明显差异(P>0.05)。对照组、模型组、TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组小鼠肠黏膜NF-κB的活性如下：5.18±0.685、21.24±1.150、18.13±1.451、6.15±0.429、6.12±0.575。模型组NF-κB表达明显高于对照组(P<0.01); TLR2mAb干预组、TLR4mAb干预组、TLR2mAb和TLR4mAb联合干预组IL-17mRNA表达明显低于模型组(P<0.01),与对照组无统计学意义(P>0.05)。结论DSS诱导的急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠粘膜的TLR2和TLR4表达明显高于正常。TLR2mAb和HR4mAb联合干预可以缓解溃疡性结肠炎模型小鼠腹泻、血便、体重下降的症状,减轻结肠黏膜组织炎症反应,下调细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17的表达,并降低信号传导通路中磷酸化P38αMAPK、c-jun、磷酸化IKK及NF-κB蛋白表达,故对DSS诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎模型有一定的干预作用,且二者有协同作用。TLR2mAb主要通过抑制NF-κB通路中关键蛋白的表达,而TLR4mAb主要通过抑制P38MAPK-c-jun通路和NF-κB通路中关键蛋白的表达,从而抑制下游细胞因子过度表达,减轻小鼠结肠黏膜炎症损伤。

全文目录


中文摘要  4-8
Abstract  8-12
前言  12-14
第一部分 TLR2mAb和TLR4mAb对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎症状及病理改变的影响  14-24
  材料与方法  14-19
  结果  19-22
  讨论  22-24
第二部分 TLR2mAb和TLR4mAb对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎肠黏膜细胞因子的影响  24-40
  材料和方法  24-30
  结果  30-36
  讨论  36-40
第三部分 TLR2mAb和TLR4mAb对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠急性期溃疡性结肠炎TLR2和TLR4共同介导的信号通路的影响  40-54
  材料和方法  40-46
  结果  46-51
  讨论  51-54
全文总结  54-55
参考文献  55-59
综述  59-68
附录  68-69
致谢  69-70

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 消化系及腹部疾病 > 肠疾病 > 大肠疾病 > 结肠疾病
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