学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

山羊腺垂体细胞分离培养及体外分泌特性研究

作　者: 尹慧勇
导　师: 马保华
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 腺垂体细胞促乳素促黄体素促卵泡素山羊
分类号: S827
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 21次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

垂体是机体内最复杂、最重要的内分泌腺,上承中枢,下系靶腺,在神经内分泌系统中具有极其重要的地位。腺垂体中的促性腺激素细胞分泌的卵泡刺激素和黄体生成素对整个生殖活动的不同阶段起重要的调控作用。在羊的繁殖过程中,产后生理性的促乳素较高,而FSH和LH水平较低,抑制卵巢功能,使母羊产后哺乳期间不能配种妊娠,产羔间隔延长,影响优良母羊生产性能的充分发挥。通过建立山羊腺垂体细胞体外无血清培养体系,研究繁殖季节(10月至翌年1月),PRL、FSH和LH的分泌特性及其之间的相互关系。对于生产实践上研究促进哺乳母羊的子宫和卵巢恢复,促进产后母羊的发情具有重要的指导意义。1.比较胰蛋白酶、胶原酶、胰蛋白酶和胶原酶混合、胰蛋白酶和透明质酸酶混合对山羊腺垂体组织消化结果。结果显示在37℃条件下,以1 g/LⅣ型胶原酶和1 g/L透明质酸酶混合消化2.5~3 h时细胞悬液粘度小,易过滤,镜下观察发现大多细胞单个存在,消化效果最好。2.比较1.5×10~5个/mL,2×10~5个/mL,4.5×10~5个/mL对腺垂体细胞增殖的影响。结果显示采用2×10~5个/mL山羊腺垂体细胞增殖效果最好,所得细胞在培养24 h开始贴壁,72 h后细胞主要呈多角形或梭形,连接成片,培养6 d左右细胞即可铺满培养皿的细胞生长面;免疫细胞化学鉴定结果显示FSH阳性细胞胞质呈蓝色,PRL阳性细胞胞质呈蓝褐色;放射免疫测定表明分离、培养的腺垂体细胞具有激素分泌活性。3.探讨体外培养的繁殖季节山羊垂体细胞PRL、FSH和LH分泌特性及其互相关系。用胶原酶和透明质酸酶联合对山羊腺垂体组织进行消化,原代细胞用生长培养液培养6天,更换为无血清培养液继续培养到第7天,再分别用含TRH、溴隐亭、HMG、GnRH和GnRH+PRL的无血清培养液及空白无血清培养液,继续培养6 h后收集培养液,用放射免疫分析法测定培养液中FSH、LH和PRL质量浓度。结果表明,无血清培养液中添加10,100 ng/mL的TRH时,培养液中PRL的浓度显著增加,同时FSH和LH的浓度显著降低;添加10,100 ng/mL的溴隐亭时,培养液中PRL浓度显著降低,而FSH和LH浓度无显著变化;GnRH单独处理或GnRH联合PRL处理时,培养液中FSH和LH的浓度均显著增加;添加50,100 ng/mL的HMG时,培养液中PRL浓度显著降低,而FSH、LH浓度显著升高。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-10
文献综述  10
第一章山羊促乳素和促性腺激素的研究进展  10-26
  1.1 垂体的解剖位置  10-11
  1.2 腺垂体细胞类别的多样性  11
  1.3 垂体前叶细胞的超微结构  11-12
    1.3.1 生长激素细胞  11
    1.3.2 促乳素细胞  11
    1.3.3 促甲状腺激素细胞  11
    1.3.4 促性腺激素细胞  11-12
    1.3.5 促肾上腺皮质激素细胞  12
    1.3.6 滤泡性细胞  12
  1.4 促乳素的研究现状  12-18
    1.4.1 促乳素和其受体的结构  12-13
    1.4.2 PRL 的生物学作用  13-15
    1.4.3 PRL 的分泌  15-16
    1.4.4 PRL 的调控  16-18
  1.5 促性腺激素的研究现状  18-25
    1.5.1 促性腺激素和其受体的结构  18-20
    1.5.2 促性腺激素的生物学作用  20-21
    1.5.3 促性腺激素的分泌  21-23
    1.5.4 FSH 和LH 的调控  23-25
  1.6 PRL 和FSH、LH 的测定方法  25
  1.7 小结  25-26
第二章山羊腺垂体细胞无血清培养模型的建立  26-37
  2.1 材料  26-27
    2.1.1 组织采取  26
    2.1.2 主要试剂  26
    2.1.3 主要溶液的配制  26-27
    2.1.4 仪器设备  27
    2.1.5 试验用品  27
  2.2 试验方法  27-30
    2.2.1 山羊腺垂体的采集  27-28
    2.2.2 山羊腺垂体组织的消化  28
    2.2.3 山羊腺垂体细胞最佳接种浓度的确定  28
    2.2.4 培养皿底部铺有不同的物质对山羊腺垂体细胞增殖的结果  28-29
    2.2.5 山羊腺垂体细胞的鉴定  29-30
    2.2.6 山羊腺垂体细胞的分泌功能判定  30
    2.2.7 数据处理与统计  30
  2.3 结果分析  30-35
    2.3.1 山羊腺垂体不同消化方案的消化效果  30-31
    2.3.2 山羊腺垂体细胞最佳接种浓度的确定  31-32
    2.3.3 培养皿底部铺有不同的物质对山羊腺垂体细胞增殖的影响  32-34
    2.3.4 山羊腺垂体细胞的培养特性  34
    2.3.5 山羊腺垂体细胞鉴定结果  34-35
    2.3.6 PRL、FSH 和LH 浓度的测定结果  35
  2.4 讨论  35-36
  2.5 小结  36-37
第三章体外培养的山羊腺垂体细胞分泌FSH、LH 和PRL 的特性研究  37-45
  3.1 材料  37-38
    3.1.1 试验材料  37
    3.1.2 主要试剂  37-38
    3.1.3 主要培养液配制  38
    3.1.4 仪器设备  38
    3.1.5 试验用品  38
  3.2 试验方法  38-39
    3.2.1 山羊腺垂体的分离与培养  38-39
    3.2.2 试验设计  39
    3.2.3 培养液中激素浓度的测定  39
    3.2.4 数据处理与统计  39
  3.3 结果分析  39-42
    3.3.1 PRL 处理体外培养的山羊腺垂体细胞后培养液中FSH 和LH 浓度测定结果  39-40
    3.3.2 TRH 处理体外培养的山羊腺垂体细胞后培养液中FSH、LH 和PRL 浓度测定结果  40
    3.3.3 溴隐亭处理体外培养的山羊腺垂体细胞后培养液中FSH、LH 和PRL 浓度测定结果  40-41
    3.3.4 GnRH 处理体外培养的山羊腺垂体细胞后培养液中FSH、LH 和PRL 浓度测定结果  41
    3.3.5 GnRH 和 PRL 共同处理体外培养的山羊腺垂体细胞后培养液中 FSH 和LHL 浓度测定结果  41-42
    3.3.6 hMG 处理体外培养的山羊腺垂体细胞后培养液中FSH、LH 和PRL 浓度测定结果  42
  3.4 讨论  42-44
    3.4.1 TRH 与PRL 和FSH、LH 的关系  42-43
    3.4.2 溴隐亭与PRL 和FSH、LH 的关系  43
    3.4.3 GnRH 与PRL 和FSH、LH 的关系  43
    3.4.4 hMG 与PRL 和FSH、LH 的关系  43-44
  3.5 小结  44-45
结论  45-46
参考文献  46-52
致谢  52-53
作者简介  53

山羊腺垂体细胞分离培养及体外分泌特性研究

内容摘要

全文目录

相似论文