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应用骨髓基质细胞片层构建组织工程骨的实验研究

作　者: 王玲玲
导　师: 樊功为；李宁毅
学　校: 青岛大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 骨髓基质细胞细胞片层温度反应性培养皿组织工程骨
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的探讨犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)细胞片层在构建组织工程骨中的作用。方法制备犬同种异体脱钙骨基质(dermineralized bone matrix, DBM)。将人重组骨形态发生蛋白-2(recombination human bone morphogenetic protein-2, rhBMP-2)复合到DBM上。抽取犬髂骨骨髓,采用密度梯度离心法分离犬骨髓基质细胞(BMSCs),将其向成骨细胞诱导分化。将经成骨诱导的第3代细胞接种于温度反应性培养皿中培养,至细胞增殖并互相融合时,将培养箱温度降至20℃,制备完整的BMSCs细胞片层,将其包裹DBM/rhBMP-2/BMSCs复合体植入犬左侧背阔肌下包裹胸背动静脉束为实验侧,以无BMSCs细胞片层包裹的DBM/rhBMP-2/BMSCs复合体植入犬右侧背阔肌下包裹胸背动静脉束为对照侧。术后8、12、16周取材行大体观察、影像学观察及组织学观察,评价成骨情况。采用SPSS18.0统计软件对数据进行两样本均数差别的t检验。结果1.制备的BMSCs细胞片层完整致密,在支架复合体表面生长良好。2.成骨面积实验侧>对照侧,两者之间差异有显著性(P<0.05)。术后16周,实验侧有大量板层骨形成,有哈弗氏系统形成,骨髓腔内有红骨髓；对照侧有板层骨形成,无哈弗氏系统形成,骨髓腔内无红骨髓。结论BMSCs细胞片层可促进具有致密板层骨和哈弗氏系统的组织工程骨的形成。

全文目录

摘要  2-4
Abstract  4-8
引言  8-9
第1章材料与方法  9-15
  1.1 实验材料与设备  9-10
    1.1.1 实验动物  9
    1.1.2 主要设备  9
    1.1.3 主要材料和试剂  9-10
    1.1.4 主要材料与试剂的配制  10
  1.2 实验方法  10-13
    1.2.1 犬同种异体脱钙骨基质的制备  10-11
    1.2.2 DBM观察与物理性能检测  11
    1.2.3 DBM/rhBMP-2复合体的制备  11
    1.2.4 犬骨髓基质细胞的分离、培养及成骨诱导  11-12
    1.2.5 BMSCs细胞片层的制备  12
    1.2.6 DBM/rhBMP-2/BMSCs/BMSCs细胞片层复合体的构建  12-13
    1.2.7 扫描电镜观察  13
    1.2.8 动物实验  13
  1.3 观察方法  13-14
    1.3.1 大体观察  13
    1.3.2 影像学观察  13-14
    1.3.3 组织学观察  14
  1.4 统计方法  14-15
第2章结果  15-18
  2.1 DBM观察与物理性能检测结果  15
    2.1.1 大体观察  15
    2.1.2 扫描电镜观察  15
    2.1.3 孔隙率测定  15
    2.1.4 孔径测定  15
  2.2 培养的细胞的形态学观察  15-16
    2.2.1 原代培养的犬BMSCs的形态学观察  15
    2.2.2 传代培养的犬BMSCs的形态学观察  15
    2.2.3 犬BMSCs的成骨诱导后的形态学观察  15-16
    2.2.4 钙结节茜素红染色  16
  2.3 BMSCs细胞片层的形成情况  16
  2.4 扫描电镜观察  16
  2.5 动物实验大体观察  16
  2.6 影像学观察  16
  2.7 组织学观察  16-18
第3章讨论  18-22
第4章结论  22-23
参考文献  23-27
附图  27-42
综述  42-59
  参考文献  53-59
攻读学位期间的研究成果  59-60
致谢  60-61

应用骨髓基质细胞片层构建组织工程骨的实验研究

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