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网织红细胞计数质控物的研制与评价

作　者: 朱晓雪
导　师: 彭明婷
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 网织红细胞计数质控物均匀性稳定性室间质量评价室内质量控制
分类号: R446.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:为了保证网织红细胞计数检测结果的可靠性和可比性,临床实验室要开展室内质量控制,并参加室间质量评价活动。这些质量保证措施的开展均需要合格的网织红细胞计数质控物,但是目前无国产的网织红细胞计数质控物,质控物的提供主要依赖于国外生产商(比如Sysme公司的e-CHECK等),进口网织红细胞计数质控物价格昂贵,购买周期长,给临床实验室和室间质量评价组织机构的应用带来很大困难。为此,卫生部临床检验中心参考国内外文献,以猪血为原料研制了网织红细胞计数质控物。方法:研制过程中,对多种影响因素进行了分析和研究,选择最佳制备方案,制备出以猪血为原料的批号分别为2008112501、2008112502、2009032601、2009032602、2009032603、2009032604、2009032605的网织红细胞计数质控物。依据CNAS-GL03《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》及ISO Guide 35《标准物质/标准样品的定值一通用原则和统计原理》,对自制质控物进行均匀性和稳定性评价。从各批号自制质控物中随机抽取出足够数量的样本,每支样本重复检测两次,对检测结果进行单因素方差分析并计算均匀性的不确定度,同时检测进口质控物进行比较,因为进口质控物购买不便,选取两支进口质控物分别连续检测9次,将所得结果与自制质控物均匀性检测结果进行比较;将按照随机顺序抽取的质控物分别放置于冷藏条件(2～8℃)、室温条件(18～25℃)、37℃条件,按照不同的时间间隔对质控物进行检测,观察不同放置温度对质控物检测结果的影响;将质控物开瓶检测后重新放置于冷藏条件(2～8℃),按照不同的时间间隔对质控物进行检测,观察质控物的开盖稳定性;将质控物放置于冷藏条件(2～8℃),按照不同时间间隔随机抽取质控物进行检测,用一元线性回归分析评价质控物的长期稳定性,并对稳定性的不确定度进行计算,同时将自制质控物稳定性检测数据与进口质控物室内质控数据进行比较;选用Sysmex XE2100,SysmexSE9500,Coulter LH750,Coulter HmX,Bayer AVDIA120型号的血液分析仪对自制网织红细胞计数质控物检测以观察质控物是否适用于不同型号仪器;使用手工法对自制质控物进行煌焦油蓝染色后镜检计数,观察质控物是否适用于手工法检测:将自制质控物试用于室内质量控制,与进口质控物同时在Sysmex XE2100上进行检测,将所得结果进行比较。结果:①筛选方案,制备了以猪血为原料的网织红细胞计数质控物;②自制2008112501、2008112502、2009032601、2009032602、2009032603、2009032604、2009032605批号质控物网织红细胞百分比检测结果的变异系数(CV)分别为4.2%、5.9、8.1%、5.2%、6.3%、3.3%、7%,进口82590801、82590803批号网织红细胞计数百分比检测结果的变异系数为2.9%、5.9%;对自制质控物均匀性检测结果进行方差分析,样品内和样品间统计学分析差异无统计学意义(P＞0.05);各批号质控物均匀性检测结果的不确定度分别为0.330%、0.039%、0.096%、0.113%、0.434%、0.268%、1.821%,各批号的均匀性检测结果不确定度均小于或接近于各自批号的重复性测量的不确定度;③2009032601及2009032604批号的质控物室温(18～25℃)放置相对于冷藏(2～8℃)放置15天检测结果的最大偏差分别为5.81%、2.72%,可以认为室温下放置15天对质控物检测结果无影响;质控物在37℃放置后,下层细胞凝结成块,不易混匀,表明质控物不宜高温放置;④2008112501、2008112502批号质控物14天开瓶稳定性检测结果的偏差分布范围为-5.0%～0、-12.3%～0,对其进行方差分析,P直均大于0.05,统计学上无显著意义;⑤自制2008112501、2008112502批号质控物70天内的稳定性检测结果CV值分别为1.8%、2.3%,随储存时间不存在明显趋势变化(P＞0.05);82590801、82590803进口批号质控物49天内的稳定性检测结果CV值分别为5.9%、6.4%,随储存时间不存在明显趋势变化(P＞0.05);当效期为70天时,2008112501、2008112502批号质控物长期稳定性检测结果的不确定度为0.066%、0.0297%,均小于各自批号重复性测量的不确定度。⑥不同批号自制质控物在Sysmex XE2100、SysmexSE9500、Coulter LH750、Bayer AVDIA120上检测结果的CV值范围分别为3.3%～8.1%、5.3%～11.6%、9.2%～9.7%、3.9～8.9%,在Coulter HmX型号仪器上检测结果重复性很差,CV值为93.7%。⑦不同批号自制质控物使用手工法对网织红细胞计数百分比进行检测,CV值分别为25%、21.8%、16.9%、13.1%、10.4%。⑧2009032601、2009032604批号自制质控物室内质量控制检测结果的CV值分别为2.7%、3.3%,90610801、90610802、90610803批号的进口质控物室内质量控制检测结果的CV值分别为7.1%、4.7%、6.4%,自制质控物与进口质控物每日检测结果都在均值±3SD范围之内。可以认为自制的网织红细胞计数质控物适用于SysmexXE2100作室内质控。结论:研制的网织红细胞计数质控物均匀性良好:在室温下放置15天可保持稳定,而37℃放置不稳定:14天内的开瓶稳定性良好;在冷藏条件下放置70天可保持稳定;可用于Sysmex XE2100,Sysmex SE9500,Coulter LH750,BayerAVDIA120型号血液分析仪进行网织红细胞计数的检测,不适用于Coultar HmX型号血液分析仪,考虑可能与Coulter HmX进行网织红细胞计数检测为半自动检测,需要预先对质控物进行手工染色有关,因为全国范围内采用Coulter HmX型号血液分析仪进行网织红细胞计数检测的医院只有5家,考虑对将来室间质评活动的开展影响不大;手工法计数结果的CV值较大,考虑与手工法方法本身重复性不佳,计数细胞数目较少,易受检测人员影响有关。对自制网织红细胞计数质控物进行均匀性、稳定性及适用性评价结果显示,自制质控物可基本满足网织红细胞计数室间质量评价的要求。对自制质控物试用于室内质量控制,每日检测结果都在均值±3SD范围之内,可以认为自制的网织红细胞计数质控物适用于Sysmex XE2100作室内质控。

全文目录

中文摘要  5-8
英文摘要  8-11
前言  11-12
第一部分网织红细胞计数全血质控物的研制  12-26
  一、研制背景  14
  二、器材与试剂  14-15
    2.1 设备与耗材  14-15
      2.1.1 设备  14-15
      2.1.2 耗材  15
    2.2 试剂  15
    2.3 原料  15
  三、研制方法  15-18
    3.1 网织红细胞计数质控物制备原料的选择  15-16
      3.1.1 检测新鲜猪血中网织红细胞数量  16
      3.1.2 检测新鲜兔血中网织红细胞数量  16
      3.1.3 检测新鲜人血中网织红细胞数量  16
    3.2 网织红细胞计数质控物制备条件的实验研究  16-17
      3.2.1 网织红细胞富集方法的选择  16-17
      3.2.2 网织红细胞固定剂的选择  17
      3.2.3 网织红细胞保存液的选择  17
    3.3 网织红细胞计数质控物的制备  17-18
      3.3.1 分装容器的选择  17-18
      3.3.2 制备过程  18
  四、结果与讨论  18-24
    4.1 网织红细胞计数质控物制备原料的选择  18-20
      4.1.1 检测新鲜猪血中网织红细胞数量  18-19
      4.1.2 检测新鲜兔血中网织红细胞数量  19
      4.1.3 检测新鲜人血中网织红细胞数量  19-20
    4.2 网织红细胞计数质控物制备条件的实验研究  20-24
      4.2.1 网织红细胞富集方法的选择  20-22
      4.2.2 网织红细胞固定剂的选择  22-23
      4.2.3 网织红细胞保存液的选择  23-24
    4.3 网织红细胞计数质控物的制备  24
  五、结论  24-26
第二部分网织红细胞计数质控物的评价  26-54
  一、评价依据  28-29
  二、设备与材料  29
    2.1 设备  29
    2.2 试剂  29
  三、评价方法  29-33
    3.1 无菌检查  29
    3.2 仪器精密度评价  29
    3.3 均匀性评价方法  29-31
      3.3.1 取样数目  30
      3.3.2 取样方式  30
      3.3.3 评价方法  30-31
      3.3.4 数据分析  31
    3.4 稳定性评价方法  31-32
      3.4.1 储存条件  31
      3.4.2 不同储存温度对质控物检测结果的影响  31-32
      3.4.3 开盖稳定性评价  32
      3.4.4 长期稳定性评价  32
    3.5 适用性评价  32-33
    3.6 室内质量控制  33
  四、结果与讨论  33-53
    4.1 无菌检查  33
    4.2 仪器精密度评价  33-34
    4.3 均匀性评价结果及数据分析  34-43
      4.3.1 均匀性评价结果  34-40
      4.3.2 均匀性评价结果的分析与讨论  40-43
    4.4 稳定性评价结果  43-50
      4.4.1 不同储存温度对网织红细胞计数质控物检测结果的影响  43-45
      4.4.2 开瓶稳定性评价结果  45-47
      4.4.3 长期稳定性评价结果  47-50
    4.5 适用性评价  50-52
      4.5.1 自制质控物在不同型号仪器上检测结果  50-51
      4.5.2 自制质控物手工法检测结果  51-52
    4.6 室内质量控制  52-53
  五、结论  53-54
参考文献  54-56
论文综述  56-69
附录  69-70
致谢  70

网织红细胞计数质控物的研制与评价

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