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两个转ipt-bar双价基因水稻农艺性状分析及外源基因清除系统(Gene-deletor)导入水稻恢复系的研究

作 者: 蒋杰
导 师: 赵德刚
学 校: 贵州大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: 转基因水稻 农艺性状 外源基因清除技术 农杆菌介导遗传转化
分类号: S511
类 型: 硕士论文
年 份: 2009年
下 载: 17次
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内容摘要


本研究对转ipt-bar双价基因EY105-T19水稻株系和R527-T1水稻株系在封闭条件下,进行田间比较试验,同时,以籼稻恢复系品种R527和绵恢047为材料,将外源基因清除系统表达载体,通过农杆菌介导法进行了遗传转化研究。获得结果如下:1.以田间条件下转ipt-bar双价基因EY105-T19株系T6代和转ipt-bar双价基因R527-T1株系T3代群体为材料,研究了它们的主要农艺性状,结果表明,田间条件下,转ipt-bar双价基因EY105-T19植株的株高显著高于对照,转ipt-bar双价基因R527-T1植株的株高显著低于对照。两个稳定的转基因株系与对照相比,在穗长、有效穗数、总穗数、结实率和千粒重等农艺性状上差别不显著。随机区组比较试验证明,转ipt-bar双价基因EY105-T19产量与非转基因品种相比提高了6.95%,达到显著水平,而转ipt-bar双价基因R527-T1产量与其非转基因对照无显著差异。2.以水稻成熟种子为外植体诱导愈伤组织,发现去除75%的胚乳有效降低愈伤组织诱导的初期污染,使供试材料R527污染率降低了4.4%,绵恢047污染率降低了6.6%。采用浓度为2.0mg·L-1和3.0mg·L的2,4-D可使R527和绵恢047愈伤组织的诱导效果达到最佳。在组织分化不定芽过程中,对愈伤组织采用吸水纸脱水处理2-3天能有效加速不定芽分化并提高不定芽分化率。在继代培养基中添加15g·L-1的山梨醇明显促进胚性愈伤组织形成。获得了绵恢047再生苗53株。以农杆菌介导法将外源基因清除系统遗传转化R527,发现以农杆菌液浓度OD值为0.4侵染愈伤组织,在共培养基上添加酚类化合物乙酰丁香酮(AS)100μmol·L-1效果较好。在获得的34株再生植株中,经GUS检测获得2株阳性植株。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-7
缩略词表  7-8
第一部分 文献综述  8-30
  1 转基因作物与生物安全  8-17
    1.1 转基因作物现状  8-9
    1.2 转基因作物的价值  9-12
    1.3 转基因作物的安全性问题  12-17
  2 解决转基因作物安全性问题的主要手段  17-23
    2.1 物理隔离  18
    2.2 叶绿体转化  18-19
    2.3 雄性不育  19
    2.4 种子不育  19-20
    2.5 无融合生殖  20-21
    2.6 闭花受精  21
    2.7 基因拆分  21-22
    2.8 标记基因去除策略  22-23
  3 外源基因清除技术(Gene deletor)  23-25
  4 转基因水稻的环境释放情况  25-26
  5 转基因恢复系水稻的遗传转化  26-28
  6 立题依据及意义  28-30
第二部分 转ipt-bar双价基因水稻农艺性状研究  30-36
  前言  30
  1 材料方法  30-32
    1.1 实验材料  30
    1.2 转基因水稻鉴定与分析  30-31
    1.3 试验设计、试验过程  31
    1.4 农艺性状观察与产量测定  31-32
  2 结果分析  32-34
    2.1 转基因水稻分子检测  32
    2.2 转基因水稻的分蘖消长规律  32-33
    2.3 农艺性状和产量相关性状测定结果  33-34
  3 讨论  34-36
第三部分 外源基因清除系统(Gene Deletor)导入水稻恢复系的研究  36-52
  前言  36
  1 实验材料  36-38
    1.1 植物材料  36
    1.2 菌种和质粒  36-37
    1.3 主要生物化学试剂  37
    1.4 主要仪器  37
    1.5 常用培养基  37-38
  2 实验方法  38-42
    2.1 恢复系籼稻再生体系的优化  38-39
    2.2 恢复系籼稻的遗传转化  39-41
    2.3再生植株的检测  41-42
  3 结果分析  42-48
    3.1 外植体、基因型对愈伤组织诱导的影响  42
    3.2 胚乳对外植体污染和愈伤组织诱导的影响  42-43
    3.3 2,4-D浓度对诱导成熟胚愈伤组织的影响  43-44
    3.4 干燥处理对愈伤组织分化的影响  44
    3.5 山梨醇、甘露醇对愈伤组织质量的影响  44-45
    3.6 菌液浓度对转化效率的影响  45-46
    3.7 AS对转化的影响  46-47
    3.8 水稻恢复系的遗传转化  47-48
  4 讨论  48-51
  5 下一步的研究工作  51-52
致谢  52-53
参考文献  53-63
附录  63-65

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 禾谷类作物 >
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