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丹参中具有醌还原酶诱导活性化合物的发现

作　者: 章敏
导　师: 马忠俊
学　校: 浙江大学
专　业: 中药学
关键词: 醌还原酶丹参谷胱甘肽液质联用
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本文对丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge.)的脂溶性部分化学成分进行了研究,从中分离得到了15个丹参酮类的物质,并通过波谱手段对化学结构给予了鉴定,分别为15,16-二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、丹参二醇B、隐丹参酮、小红参醌丙、17-羟基隐丹参酮、1,2-二氢丹参酮Ⅰ、丹参新酮、1-oxomiltirone、4-亚甲丹参新酮、1,2-二脱氢丹参新酮、丹参新醌B。肿瘤的发展有多个阶段,在肿瘤发生的初期应用一些化学物质来防止肿瘤的进一步形成也已经变得越来越受重视。二相酶对于预防肿瘤的发生具有重要的意义,醌还原酶(QR)是二相酶的一个代表,QR诱导活性对于评价化合物的化学预防作用就具有很高的参考意义。在本文中,采用一系列的方法得到了各个化合物的QR诱导实验数据。QR诱导实验表明丹参中分离得到的丹参新酮(11)、1-oxomiltirone(12)、4-亚甲丹参新酮(13)、1,2-二脱氢丹参新酮(14)具有较好的QR活性,其CD值分别为0.92μM,0.40μM,0.46μ和1.04μM。但是由于上述的生物方法周期长,花费高,本文致力于寻找一种简单快速的方法来寻找具有醌还原酶活性的化合物。在正常细胞中Keap1与Nrf2大部分是结合存在的,当外源活性物质如氧化剂、自由基等进入细胞时能和Keap1结合,使Nrf2大量释放从而转录入核,引起二相代谢酶的表达。谷胱甘肽具有与Keap1相同的结合位点巯基,能够与谷胱甘肽结合的物质可能也会与Keap1结合。本文利用GSH与丹参酮结合实验发现具有丹参新酮类似结构的丹参酮都具有很高的结合活性,而同时这个结果也与细胞实验一致,进一步证明了此方法的可行性。在确定了此方法的可行性,并且有了标准品的比较之后,本文利用此方法快速发现了丹参二氯甲烷萃取层中具有QR诱导活性的物质,并结合细胞实验对此方法给予了验证。为了确定丹参新酮与GSH反应的结合位点,利用核磁共振对此做了进一步的探讨与验证,结果表明结合位点为C-14位。由于丹参酮的裂解规律较少有研究涉及,本文还进一步对丹参酮的裂解规律进行了研究与探讨,并得出了一些较新颖的裂解途径。

全文目录

致谢  4-5
摘要  5-7
Abstract  7-9
插图和附表清单  9-10
目次  10-12
第一章绪论  12-19
  第一节丹参的化学成分与药理研究进展  12-17
    1.1 丹参的化学成分研究进展  12-14
      1.1.1 脂溶性成分  12-14
      1.1.2 水溶性成分  14
    1.2 丹参的药理学研究进展  14-17
      1.2.1 对心血管系统的作用  15
      1.2.2 神经保护作用  15-16
      1.2.3 保护肝细胞及抗肝纤维化作用  16
      1.2.4 抗肿瘤作用  16
      1.2.5 抗氧化作用  16-17
  第二节肿瘤化学预防的研究概况  17-18
  第三节本文研究内容  18-19
第二章丹参化学成分的研究  19-38
  2.1 丹参的化学成分  19-22
  2.2 化合物的结构解析  22-38
第三章丹参的醌还原酶诱导活性的研究  38-41
  3.1 QR诱导活性筛选原理  38-39
  3.2 QR诱导活性筛选方法  39
  3.3 QR诱导活性实验结果  39-41
第四章具有QR诱导活性化合物的快速鉴定  41-54
  第一节丹参提取物中具QR活性的化合物的快速鉴定  41-52
    4.1 筛选原理  41
    4.2 筛选方法  41-43
      4.2.1 实验材料及仪器  41-42
      4.2.2 色谱及质谱条件  42
      4.2.3 实验步骤  42-43
    4.3 实验结果  43-52
      4.3.1 LC-MS方法评价丹参酮单体与GSH结合能力  43-47
      4.3.2 核磁共振验证丹参新酮与GSH的结合  47-49
      4.3.3 LC-MS方法鉴定二氯甲烷层中与GSH结合成分  49-52
  第二节丹参酮类化合物的裂解规律  52-54
    4.4 实验方法  52
    4.5 实验结果  52-54
第五章化学成分的提取与分离  54-58
  第一节实验仪器与试剂  54
    5.1 仪器  54
    5.2 材料与试剂  54
  第二节丹参化学成分的提取与分离  54-58
    5.3 植物来源与鉴定  54
    5.4 药材的提取  54-55
    5.5 化学成分的分离  55-58
第六章结论与讨论  58-60
参考文献  60-65
作者简历  65-66
附图  66-69

丹参中具有醌还原酶诱导活性化合物的发现

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