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VIP对LPS应激肺内IL-17及其受体表达的影响与机制

作　者: 唐春燕
导　师: 管茶香
学　校: 中南大学
专　业: 生理学
关键词: 血管活性肠肽 巨噬细胞 肺成纤维细胞 急性肺损伤 白细胞介素17 白细胞介素17受体
分类号: R563
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


血管活性肠肽(VIP)是肺内非胆碱能非肾上腺能神经的主要递质之一,对多种免疫细胞的增殖、分化和生物学功能等具有调节作用。VIP可抑制肺泡巨噬细胞吞噬和T细胞增殖、减少肺炎性介质释放、促进气道上皮的损伤修复、清除氧自由基及抗细胞凋亡。白细胞介素17(IL-17)是CD4+T细胞亚群Thl7细胞来源的促炎症细胞因子,具有强大的募集粒细胞、促进多种炎性细胞因子释放及炎症放大效应。IL-17包括6个亚型,IL-17A～F,IL-17家族中最早被发现和最重要的是IL-17A。IL-17主要通过与受体(IL-17R)结合发挥生物学效应。IL-17R证实有5个亚型(IL-17RA-IL-17RD和SEF),其中IL-17RA和IL-17RC均可与IL-17A结合。IL-17R广泛表达于B淋巴细胞、T淋巴细胞、骨髓单核细胞、成纤维细胞和上皮细胞等多种细胞。研究显示：在哮喘和肺部感染患者的支气管肺泡灌洗液中工L-17含量显著增加；囊性纤维化患者气道内IL-17大量存在；IL-17R缺乏的过敏性肺炎小鼠肺部炎症和纤维化明显减少。在上述过程中,肺内IL-17主要来源于Th17细胞还是肺内其他细胞?肺泡巨噬细胞作为肺内重要的常驻细胞能否分泌IL-177肺成纤维细胞作为肺纤维化过程中的重要效应细胞,其胞膜上IL-17R的表达有何变化?以及VIP对肺内IL-17和IL-17R表达的调节作用尚未见报道。目的：观察VIP对LPS应激肺内IL-17和IL-17R表达的影响,并初步探讨其信号转导途径。方法：1.以昆明小鼠为研究对象,腹腔注射LPS建立急性肺损伤(ALI)模型。取肺组织切片,HE染色后进行组织病理学观察；对支气管肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞进行计数和分类；采用ELISA法检测BALF和肺组织匀浆中IL-17的蛋白含量；用RT-PCR法检测小鼠肺组织匀浆中IL-17A mRNA和工L-17RA／C mRNA的表达。2.VIP对LPS诱导的巨噬细胞工L-17表达和分泌的影响：以巨噬细胞为研究对象,采用ELISA法检测巨噬细胞培养上清液中IL-17含量；采用RT-PCR法检测巨噬细胞IL-17A mRNA的表达,并观察PKC阻断剂H-7、PKA阻断剂H-89对VIP调节作用的影响。3.VIP对LPS诱导的肺成纤维细胞IL-17R蛋白和工L-17RA／C mRNA表达的影响：以肺成纤维细胞为研究对象,采用流式细胞术检测肺成纤维细胞胞膜上IL-17R蛋白的表达；采用RT-PCR法检测肺成纤维细胞IL-17RA／C mRNA的表达；并观察PKC阻断剂H-7、PKA阻断剂H-89对VIP调节作用的影响。结果：1.小鼠肺组织形态学和细胞分子的变化(1)肺组织病理切片染色显示,ALI组肺间隙增厚,肺泡结构紊乱,渗出明显增加,大量炎症细胞浸润。(2)白细胞计数结果显示,ALI组小鼠BALF中白细胞数(35.57±3.27×106)显著大于对照组小鼠BALF中的白细胞数(21.48±1.39×106),其中中性粒细胞大量增多(16.71±2.14×106,P<0.01)。(3)ELISA结果显示,ALI组小鼠BALF(142.46±2.41 pg／m1)和肺组织匀浆(577.30±5.98 pg／m1)中IL-17的蛋白含量明显增加(P<0.05)。(4)RT-PCR检测结果显示,ALI组小鼠肺组织匀浆中IL-17A mRNA表达显著增加(0.34±0.02)(P<0.01)；IL-17RA mRNA表达无明显变化；IL-17RC mRNA表达显著增多(0.68±0.03)(P<0.05)。2.VIP对LPS诱导的巨噬细胞IL-17表达和分泌的影响：(1)ELISA结果显示,LPS可在各个时间点(4,6,12,24h)上调巨噬细胞IL-17蛋白的分泌,且在6h达到峰值(74.32±3.07)pg／ml；VIP可部分逆转该上调作用,并呈时间(4,6,12,24h)、剂量相关性(10-8mol／L-10-6mol／L)；VIP(10-8mol／L)下调LPS诱导6h巨噬细胞IL-17蛋白分泌的效应可被H-7和H-89部分阻断(P<0.05)。(2)RT-PCR检测结果显示,LPS可在各个时间点(2,4,6,12,24h)上调巨噬细胞IL-17A mRNA的表达,且在6h(1.09±0.09)达到峰值；VIP可部分逆转该上调作用,并呈时间(4,6,12,24h)、剂量相关性(10-8mol／L-10-6mol／L)；VIP(10-8mol／L)下调LPS诱导6h巨噬细胞IL-17A mRNA表达的效应可被H-7和H-89部分阻断(P<0.01)。3.VIP对LPS诱导的肺成纤维细胞IL-17R蛋白和IL-17RA／C mRNA表达的影响：(1)RT-PCR检测结果显示,LPS在各个时间点(2,4,6,12,24h)对肺成纤维细胞工L-17RA mRNA表达无明显影响；LPS刺激肺成纤维细胞6h后,其IL-17RC mRNA表达明显上调(1.51±0.05)(P<0.05),VIP可部分逆转该上调作用,VIP下调LPS诱导6h肺成纤维细胞IL-17RC mRNA表达的效应可被H-7和H-89部分阻断(P<0.05)。(2)流式细胞术检测结果显示,LPS刺激肺成纤维细胞6h后,其IL-17R蛋白表达明显增加(0.75±0.10)(P<0.05)；VIP预处理可降低该效应；VIP调节LPS诱导的肺成纤维细胞表达IL-17蛋白的效应可被H-7和H-89所阻断(P<0.05)。结论：1.LPS能促进肺内IL-17、IL-17R蛋白和IL-17RC mRNA的表达。2.LPS可诱导巨噬细胞表达IL-17,VIP可下调此效应,其胞内信号转导途径与PKC、PKA有关。3.LPS可上调肺成纤维细胞IL-17R蛋白和IL-17RCmRNA的表达,VIP可下调此效应,其胞内信号转导途径与PKC、PKA有关。

全文目录


摘要  4-7
ABSTRACT  7-12
前言  12-15
第一章 VIP对LPS应激肺内IL-17表达的影响及其机制  15-32
  1.1 材料  15-16
  1.2 方法  16-20
  1.3 实验结果  20-22
  1.4 讨论  22-24
  1.5 附图  24-32
第二章 VIP对LPS应激肺内IL-17R表达的影响及其机制  32-44
  2.1 材料  32-33
  2.2 方法  33-35
  2.3 实验结果  35-36
  2.4 讨论  36-39
  2.5 附图  39-44
第三章 结论  44-45
参考文献  45-51
综述  51-63
  参考文献  57-63
致谢  63-64
攻读学位期间主要的研究成果  64-65

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 呼吸系及胸部疾病 > 肺疾病
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