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没食子酸通过大鼠GST促进卤代芳香烃类毒物的代谢

作　者: 张有金
导　师: 于超
学　校: 重庆医科大学
专　业: 药物化学
关键词: CDNB DCNB GST 没食子酸解毒鼠肝微粒体
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：误食水果和蔬菜中残留农药对人体带来的毒害作用严重影响着人民的身体健康。近年来，如何解除卤代芳香烃类农药的毒副作用的研究倍受关注。正常机体内谷胱甘肽硫转移酶（GST）能催化机体内卤代芳香烃类毒物与还原性谷胱甘肽（GSH）发生结合反应，增加水溶性而排出体外发挥解毒的功效。任何增加体内酶活性的因素均有利于促进毒物的代谢排出。葡萄、茶叶等果蔬品种富含没食子酸，有文献报道没食子酸具有针对有机毒物的解毒作用，但解毒机制不明确，相关的研究报道较少。本文从体内、体外代谢酶动力学研究这一新的视角出发，以大鼠为研究对象，探索没食子酸是否能够通过影响机体内解毒酶（GST）的活性，从而改变体内卤代芳香烃类毒物的代谢速率，揭示其解毒排毒分子机制，为保障人们健康饮食，增强体质，提升机体解毒排毒的能力提供重要的理论指导。方法：首先建立体外鼠肝微粒体中GST评价的孵育体系及酶活性测定HPLC分析方法，求算Vmax、Km及代谢清除率（CLint）等动力学参数，用于分析没食子酸对GST酶的动力学的影响，并对相关分子机制进行研究。通过IC50、Ki等参数评价没食子酸对以1-氯-2,4-二硝基苯（CDNB）为代表的毒物的体外代谢的影响，初步判断二者发生相互作用的模式为体内实验奠定基础。其次建立大鼠体内药物代谢评价体系，创建以DCNB为探针底物测定血药浓度的气相色谱分析方法，通过DAS3.2.1绘制DCNB的药时曲线并计算其动力学参数，用于分析没食子酸对体内卤代芳香烃类毒物的代谢的影响。为了进一步探查没食子酸在大鼠体内对GST的综合影响，采用Western Blot方法考察了肝、肾、肠中mGST-1的蛋白表达，以期全面分析评价没食子酸在体内对GST的整体影响结果。结果：大鼠肝微粒体GST的体外动力学分析显示， GST酶的Vmax为85.45nmol·min^-1·mg protein^-1；Km为15.09μmol·L^-1; Clint为5.66mL·min^-1·mg protein^-1。没食子酸在体外明显存在非时间依赖性抑制GST酶活性（IC50=14.79μM）。经超速离心和加入10Km的CDNB后，酶活性得到恢复，Ki为9.49μM。表明在体外没食子酸是GST中等强度抑制剂，属于可逆性抑制中的混合型机制。显示可能存在降低CDNB等毒物的代谢作用。体内实验表明，没食子酸干预的实验组与对照组相比AUC0-∞从10363.5±1945.6降低到7075.1±1433.2。而实验组CL/F （14.1±3.4）明显高于对照组（9.6±2.3）。在蛋白表达分析实验中，没食子酸干预的实验组中肝、肾、肠的GST蛋白表达明显强于对照组。结论：本文首次从Ⅱ相代谢酶的动力学分析角度，考察了没食子酸通过对GST酶动力学的影响而发挥其对卤代芳香烃类农药的解毒机制。揭示了没食子酸在体外虽然具有对GST的抑制作用，但在大鼠体内其可以在各器官中通过大量诱导GST表达，增加体内酶的绝对含量达到促进对卤代芳香烃类农药的代谢清除效果。从而有效发挥没食子酸解毒作用。提示日常生活中多食用富含没食子酸的食物能有效加快肌体对农药残留的清除。研究结果对于保障人们身体健康具有重要指导作用。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
摘要  7-10
Abstract  10-14
前言  14-16
第一章 HPLC 测定大鼠肝微粒体中 GST 活性及体外动力学研究  16-25
  引言  16
  1 材料与方法  16-18
  2 实验结果  18-23
  3 讨论  23-25
第二章没食子酸在体外对 CDNB 代谢清除的影响及其机制研究  25-31
  引言  25
  1 试剂和方法  25-27
  2 结果  27-29
  3 讨论  29-31
第三章没食子酸在大鼠体内对 DCNB 等毒物代谢清除的影响  31-42
  引言  31
  1 材料和方法  31-34
  2 结果  34-41
  3 讨论  41-42
全文总结  42-43
参考文献  43-47
文献综述  47-55
  参考文献  52-55
致谢  55-56
硕士期间发表的论文  56-57

没食子酸通过大鼠GST促进卤代芳香烃类毒物的代谢

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