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TRPA1通道整流的决定因素及分子机制研究

作　者: 万霞
导　师: 周远大
学　校: 重庆医科大学
专　业: 药理
关键词: TRPA1通道钙离子镁离子整流半胱氨酸突变
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：观察钙离子，镁离子对非选择性阳离子通道（TRPA1）以及单点突变对通道（L906C）整流的影响，进一步探讨TRPA1整流的分子机制。为TRPA1的深入研究作进一步探讨。方法：通过单点突变将L906亮氨酸突变为半光氨酸，经PCR扩增，测序正确的产物转染到大肠杆菌中表达，然后提取通道质粒。将单点突变后的通道质粒与携带绿色荧光蛋白的质粒按照9:1共转到HEK293细胞中表达24-36小时后，再进行电生理检测，实验过程中采用AITC使通道激活。通过替换细胞内外的二价阳离子（钙离子和镁离子）观察二价阳离子对通道电流和电容的影响。结果：（1）野生型TRPA1上位于通道蛋白离子选择性区域的L906单点突变为半胱氨酸后，通道整流方向发生了翻转。野生型为外向整流通道,L906C翻转为内向整流通道。野生型TRPA1和单点突变型L906C在-100mV和+100mV电压下，所测电流比值分别为0.47±0.07（n=7）和3.25±0.11（n=4）。（2）二价阳离子(Ca²⁺和Mg²⁺)对TRPA1野生型和L906C单点突变型通道的整流有增强作用。但二价阳离子(Ca²⁺和Mg²⁺)不能改变通道的整流方向。（3）L906C单点突变型在正电压下时呈电压和时间依赖性的失活。（4）TRPA1抑制剂HC030031和钌红（RR）在单点突变L906C上的抑制效应曲线较TRPA1野生型右移。结论：单点突变L906C使通道外向整流特性翻转为内向整流但翻转电位无变化。二价阳离子(Ca²⁺和Mg²⁺)影响TRPA1和单点突变L906C通道的整流大小，但对两个通道的整流方向无影响。TRPA1的非选择性抑制剂（RR）和选择性抑制剂（HC030031）在单点突变L906C上的抑制作用降低。与野生型的TRPA1通道相比，RR和HC030031在单点突变L906C上的量效曲线右移。表明L906位于TRPA1通道的孔道区，是通道的整流方向的决定因素。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
摘要  7-9
ABSTRACT  9-11
前言  11-13
材料与方法  13-14
方法  14-17
结果  17-30
小结  30-32
讨论  32-37
参考文献  37-41
文献综述  41-52
  参考文献  49-52
致谢  52-53
硕士期间发表的论文  53-54

TRPA1通道整流的决定因素及分子机制研究

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