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地肤子的有效成分对HaCaT细胞周期的影响

作　者: 罗美俊子
导　师: 杨志波
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中医外科学
关键词: 皂苷IC(Momordin Ic) HaCaT细胞细胞周期银屑病
分类号: R758.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

目的采用体外细胞培养实验,研究地肤子的主要有效成分对HaCaT细胞增殖及其细胞周期影响,探讨其治疗银屑病的作用机制。方法将地肤子主要有效成分按1：2比例配制成不同的药物工作浓度,分别作用于HaCaT细胞48h,以甲氨蝶呤(5ug/ml)作为阳性对照组,不加药物的作为阴性对照组。采用MTT比色法测定地肤子的主要有效成分对HaCaT细胞增殖活性的影响效率；流式细胞术分析地肤子有效成分对细胞周期效应特点。结果1、甲氨喋林组(5ug/ml)OD值与地肤子有效成分皂苷IC(Momordin Ic)25μmol/L组比较,无显著性差异(P>0.05)。2、齐墩果酸对HaCaT细胞增殖无抑制作用；3、其余皂苷IC(Momordin Ic)各浓度组均有不同程度的抑制HaCaT细胞增殖的作用,且有量效关系,呈浓度依赖性增强。不同浓度之间细胞增殖OD值有统计学意义(P<0.01)。4、流式细胞术分析细胞周期表现为甲氨喋林组(5ug/ml)OD值与地肤子有效成分皂苷IC(Momordin Ic)25μmol/L组比较,无显著性差异(P>0.05)。5、其余各浓度组具有对细胞周期的G0/G1期细胞比例增加,而S期细胞比例减少,使细胞周期阻滞于G1期,且有量效关系。结论地肤子中的皂苷IC(Momordin Ic)能抑制HaCaT细胞增殖,且使细胞周期阻滞于G1期,其机制可能与影响细胞周期有关。

全文目录

中文摘要  5-6
Abstract  6-8
引言  8-10
第一部分：地肤子有效成分筛选和制备  10-13
  一、地肤子有效成分的文献筛选  10
  二、药物的制备及浓度筛选  10-13
    2.1 皂苷IC(Momordin Ic)制备  10-11
      2.1.1 皂苷IC(Momordin Ic)浓度筛选  11
    2.2 齐墩果酸制备  11
      2.2.1 齐墩果酸浓度筛选  11
    2.3 甲氨喋林制备  11-13
第二部分：地肤子有效成分对HaCaT细胞增殖的抑制及细胞周期影响实验  13-25
  (一) 材料与方法  13-18
    1. 实验材料  13-15
      1.1 药物  13
      1.2 细胞株  13
      1.3 实验试剂  13-14
      1.4 实验仪器  14-15
    2. 实验方法  15-18
      2.1 溶液的配制  15-16
        2.1.1 0.1M磷酸缓冲液(PBS)配制  15
        2.1.2 0.25%胰蛋白酶/EDTA消化液  15
        2.1.3 MTT溶液的配制  15
        2.1.4 抗生素溶液配制  15
        2.1.5 细胞冻存液  15-16
        2.1.6 完全培养基  16
      2.2 HaCaT细胞的培养、传代  16
      2.3 HaCaT细胞的接种、增殖、冷冻  16-17
      2.4 噻唑兰比色法(MTT法)测定细胞的增殖  17
      2.5 流式细胞术检测细胞周期  17-18
    3. 统计学分析  18
  (二) 结果  18-25
    1. HaCaT细胞镜下形态观察  18-19
    2. MTT法检测地肤子有效成分干预HaCaT细胞增殖抑制的影响  19-22
      2.1 原理  19
      2.2 地肤子主要有效成分不同浓度间OD值比较  19-20
      2.3 地肤子主要有效成分对HaCaT细胞存活率比较  20-22
    3. 流式细胞仪分析检测皂苷IC(Momordin Ic)对HaCaT细胞周期的影响  22-25
      3.1 原理  22
      3.2 流式细胞检测仪检测细胞周期  22-23
      3.3 各组间细胞比例两两比较  23-25
第三部分分析与讨论  25-28
结论  28-29
致谢  29-30
参考文献  30-33
附图  33-34
附录1 综述  34-44
  摘要  34-42
  参考文献  42-44
附录2  44

地肤子的有效成分对HaCaT细胞周期的影响

内容摘要

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