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腺病毒介导的slit2 shRNA转染缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞对VEGF表达的影响

作　者: 黄莉芸
导　师: 周希瑗
学　校: 重庆医科大学
专　业: 眼科学
关键词: slit2 shRNA 视网膜色素上皮细胞血管内皮生长因子
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：观察腺病毒介导的slit2 shRNA转染缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelial cells RPE）对血管内皮生长因子（vascularendothelial growth factor VEGF）表达的影响，探讨slit2在脉络膜新生血管中的可能作用，为脉络膜新生血管（CNV）的治疗提供新的思路。方法：1.体外培养人RPE细胞，RT-PCR、免疫组化鉴定slit2及其受体在人RPE上的表达；2.200μmol/L氯化钴建立化学缺氧模型，未缺氧细胞作为空白对照组，Real-TimePCR，western-blot观察slit2及受体、VEGF在缺氧状态下的表达变化；3.将缺氧的RPE细胞随机分为Ad-shRNA（加入slit2shRNA），Ad-nμll（加入空腺病毒）、缺氧组。24h后收取细胞，Real-TimePCR、western-blot分别检测各组slit2及其受体、VEGF的mRNA和蛋白水平表达变化，ELISA检测上清中VEGF蛋白的表达变化。结果：1.在正常人RPE细胞，即有slit2及其受体Robo1、Robo4的表达；2.与空白对照组相比，缺氧组中slit2及其受体Robo1、VEGF的mRNA和蛋白水平的表达均明显增加(P<0.05)；但受体R obo4无明显变化；3.与缺氧组相比，slit2shRNA转染后Ad-shRNA处理组的slit2、Robo1、VEGF的mRNA和蛋白水平表达均降低（P<0.05）；4.缺氧组与Ad-nμll组之间slit2、Robo1、VEGF的变化无统计学意义（p>0.05）；结论：研究表明slit2-Robo1信号通路参与了CNV的形成过程， slit2shRNA沉默RPE中slit2后，可明显抑制缺氧诱导的RPE中VEGF的表达，为临床CNV的治疗提供新的方向。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-6
摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-12
第一部分人 RPE 细胞的培养及 slit2 及其受体在人 RPE 细胞中的表达  12-18
  1. 材料与方法  12-16
  2. 结果  16-17
  3. 讨论  17-18
第二部分缺氧状态下人 RPE 细胞中 slit2 及其受体以及 VEGF 的表达变化  18-24
  1. 材料与方法  18-21
  2. 结果  21-22
  3. 讨论  22-24
第三部分 slit2 shRNA 转染缺氧诱导的人 RPE 细胞后 slit2 对 VEGF 的影响  24-30
  1. 材料与方法  24-26
  2. 结果  26-29
  3. 讨论  29-30
全文结论  30-31
参考文献  31-33
文献综述  33-37
  参考文献  35-37
致谢  37-38
硕士研究生在读期间发表论文  38-39

腺病毒介导的slit2 shRNA转染缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞对VEGF表达的影响

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