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AG490对人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞株JAK2/STAT3信号通路的影响

作　者: 许蓓
导　师: 许雪亮
学　校: 中南大学
专　业: 临床医学
关键词: 视网膜母细胞瘤 JAK2/STAT3信号通路 VEGF 分子靶向治疗
分类号: R739.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的研究JAK激酶抑制剂AG490干预JAK2/STAT3信号通路后对人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞株体外抗增殖及细胞周期的作用,并观察AG490对HXO-RB44细胞株中STAT3, p-STAT3, VEGF蛋白表达的影响。探讨JAK3/STAT3信号通路及VEGF在RB发展中的作用,评估其在药物靶向治疗RB的可能性。方法(1)培养人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞株,观察活细胞生长情况。(2)实验分组及检测：本实验分为实验组和对照组,实验组又分为A、B、C、D、E、F组,HXO-RB44细胞株加入不同浓度的AG490处理,药物浓度依次为,12.5μM,25.0μM,50μM,200μW。对照组：不加任何药物处理,仅加RPMI-1640培养液进行培养。选用处于对数生长期的HXO-RB44细胞,加入不同浓度的JAK抑制剂AG490进行干预。用下列方法进一步研究：1)采用MTS试剂盒对各组细胞进行处理并检测其增殖状态。2)应用流式细胞学技术对各组中细胞凋亡及周期进行分析。3)Western blot法检测各组中STAT3、p-STAT3及VEGF蛋白的表达。结果JAK激酶抑制剂AG490处理HXO-RB4448小时后：(1)MTS法检测显示：AG490实验组(6.25μM,12.5μM,25μM,50μM,100μM,200μM)随着药物浓度的增加,细胞抑制率增加,细胞存活率下降。六个实验组的细胞抑制率平均值依次为：7.18±8.78%,20.02±2.21%,31.92±5.30%,58.61±4.27%,62.174±6.05%,72.67±1.51%,有逐渐增高的趋势,与对照组两两相比较,6.25μM实验组差异无统计学意义(P>0.05),其余五组均有显著差异,有统计学意义(P<0.05)。(2)流式细胞技术显示：根据MTS实验结果筛选5个不同浓度的实验组(6.25μM,12.5μM,25μM,50μM,100μM)的细胞,随着AG490药物浓度的增加细胞凋亡率呈逐渐增高趋势,依次为：8.944±2.21%,12.86±2.12%,13.59±1.22%,26.51±2.01%,35,37±1.95%,与对照组(凋亡率平均值：4.10±2.35%)相比,有显著差异,具有统计学意义(P<0.05)。50μM和100μM与对照组相比,细胞出现G0/G1期阻滞现象,G1期细胞比例显著增多,相应的处于S期的细胞比例减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3) Western Blot实验显示：随着AG490药物浓度的增加,STAT3蛋白的表达量逐渐下降,其灰度值依次为：2.11±0.23,1.77±0.18,1.27±0.18,1.15±0.19,0.77±0.11,与对照组(灰度值：3.84±0.21)相比,差异有统计学意义(P<0.05)；p-STAT3表达量逐渐下降,其灰度值依次为：1.12±0.12,1.11±0.11,0.82±0.09,0.38±0.04,0.35±0.04,与对照组(灰度值：1.52±0.14)相比,差异有统计学意义(P<0.05)；VEGF表达量逐渐下降,其灰度值依次为：2.56±0.11,2.51±0.14,1.96±0.18,1.81±0.12,1.31±0.06,与对照组(灰度值：2.61±0.15)相比,6.25μM,12.5μM,实验组差异无统计学意义(P>0.05),其余各实验组差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)JAK激酶抑制剂AG490抑制了HXO-RB44细胞株生长及增殖,呈浓度依赖性。(2)JAK激酶抑制剂AG490使凋亡细胞增多,促进了细胞的凋亡并改变了周期的分布,并呈浓度依赖性。(3)JAK激酶抑制剂AG490可通过阻断JAK2/STAT3信号通路而下调STAT3, p-STAT3, VEGF的表达,从而抑制了HXO-RB44细胞株的增殖,加速其凋亡的发生。(4)上述结果为AG490靶向治疗视网膜母细胞瘤提供了理论依据和实验基础。

全文目录


摘要  4-7
ABSTRACT  7-11
缩略语及中英文对照表  11-12
1 前言  12-14
2 材料和方法  14-20
  2.1 实验材料  14-15
    2.1.1 细胞株来源  14
    2.1.2 实验仪器  14
    2.1.3 主要耗材及实验试剂  14-15
    2.1.4 主要试剂的配制  15
  2.2. 实验方法  15-19
    2.2.1 细胞培养  15-16
      2.2.1.1 人视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞的复苏及传代培养  15-16
      2.2.1.2 细胞的冻存  16
      2.2.1.3 细胞计数  16
    2.2.2 实验分组  16
    2.2.3 MTS法检测AG490对HXO-RB44细胞体外增殖的影响  16-17
    2.2.4 流式细胞技术检测AG490对HXO-RB44细胞凋亡的影响  17
    2.2.5 Western Blot法检测AG490对HXO-RB44细胞STAT3,p-STAT3、VEGF蛋白表达水平的影响  17-19
  2.3 统计学方法  19-20
3 结果  20-27
  3.1 AG490对HXO-RB44细胞体外增殖的影响  20-21
  3.2 AG490对HXO-RB44细胞凋亡的影响  21-24
  3.3 AG490对HXO-RB44细胞STAT3,P-STAT3、VEGF蛋白表达水平的影响  24-27
4. 讨论  27-30
5 结论  30-31
参考文献  31-34
综述  34-51
  参考文献  42-51
攻读硕士研究生期间所获成绩  51-52
致谢  52

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 眼肿瘤
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