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YWHAZ和VDAC1基因在甲状旁腺腺瘤中的表达及临床相关性研究

作　者: 金钊
导　师: 廖泉
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: 甲状旁腺腺瘤 RNAlater YWHAZ VDAC1 临床表型
分类号: R736.2
类　型: 博士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

研究背景原发性甲状旁腺功能亢进症,临床表现为高钙血症、低磷血症、骨骼病变以及泌尿系统结石等症状。该病的致病因素存在较大异质性,随着分子生物学技术的不断进展,不断涌现出许多针对其肿瘤标记物的研究。2011年Giusti等人通过蛋白质组学技术筛选出YWHAZ和VDAC1基因在甲状旁腺腺瘤中过量表达。故本实验在上述研究的基础上,希望进一步探求YWHAZ和VDAC1基因在我国甲状旁腺腺瘤中的表达情况,并分析其与患者临床表现之间的关系,为甲状旁腺肿瘤的早发现、早诊断以及开辟新的治疗靶点提供一定的帮助。RNAlater可以稳定保护RNA的完整性,确保下游分析得到的数据真实地反应样品信息。本实验通过比较液氮速冻法和RNAlater保存法的两组标本RNA的表达情况,来探讨RNAlater在长期保存甲状旁腺组织中发挥的作用,为组织标本库的规范化建设提供一定的理论基础。研究目的1.评价不同保存方式对于甲状旁腺腺瘤标本的影响。2.检测YWHAZ和VDAC1基因在中国甲状旁腺腺瘤组织中的表达情况,分析其表达与患者临床表型之间的关系。研究方法1.收集22例甲状旁腺腺瘤组织标本,其中11例经RNAlater处理后-80℃保存,其余11例为术后即刻液氮封存,并转移至-80℃保存。比较两组标本RNA保存情况的差异。2.收集28例散发性甲状旁腺腺瘤的组织标本及临床资料,提取细胞总RNA和总蛋白,使用RealTime-PCR和Wester Blot等方法,检测甲状旁腺腺瘤细胞中YWHAZ和VDAC1基因的RNA及蛋白表达水平,并进一步分析其与患者临床表型的关系。实验结果1.速冻法与RNAlater法相比,在组织总RNA的提取纯度和浓度以及RNA完整性的结果上无统计学差异。但RNAlater组内参基因β-actin的表达量高于速冻法组(P<0.01)。2.28例甲状旁腺腺瘤的最大直径与患者术前总血钙、血磷、血ALP、血PTH和骨痛症状等因素显著相关(P<0.05)。3. YWHAZ基因高表达组患者与低表达组相比,术前游离钙、总血钙水平高,血磷水平低,同时骨质破坏表现也更为严重(P<0.05)。4. VDAC1基因在28例甲状旁腺腺瘤中表达水平较低,且与患者生化指标无明显的相关性。实验结论1. RNAlater与速冻方法相比,对于保存甲状旁腺腺瘤组织RNA具有一定优势。2.在全国多中心研究中,RNAlater在标本转运和保存过程中体现出较大优势。3.甲状旁腺腺瘤大小与患者临床症状的严重程度呈正相关。4. YWHAZ基因表达水平与患者血钙磷水平相关,有望成为甲状旁腺腺瘤早发现、早诊断的重要指标。5. VDAC1基因在甲状旁腺腺瘤中表达水平低,且与患者生化指标无明显相关性。

全文目录

缩略语表  4-5
中文摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-11
第一部分 RNAlater在甲状旁腺腺瘤组织保存中作用的评估  11-25
  前言  11-12
  实验材料  12-16
  实验结果  16-22
  讨论  22-24
  结论  24-25
第二部分 YWHAZ基因在甲状旁腺腺瘤中的表达及临床相关性分析  25-50
  前言  25-26
  实验流程  26-29
  实验方法  29-33
  实验结果  33-43
  讨论  43-49
  结论  49-50
第三部分 VDAC1基因在甲状旁腺腺瘤中的表达及临床相关性分析  50-59
  前言  50
  实验结果  50-56
  讨论  56-59
  结论  59
参考文献  59-61
综述  61-73
  参考文献  69-73
致谢  73-74

YWHAZ和VDAC1基因在甲状旁腺腺瘤中的表达及临床相关性研究

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