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MRTF-A参与诱导脑胶质瘤细胞分化的研究

作　者: 赵丽娜
导　师: 张同存
学　校: 天津科技大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 脑胶质瘤 MRTF-A 细胞分化 Egr-1
分类号: R739.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

脑胶质细胞瘤是最常见的神经系统的肿瘤,国内统计脑肿瘤中胶质细胞瘤发病率最高。MRTF-A是血清反应因子(SRF)的协同转录因子,它与SRF相互作用进一步调控启动子上含有CArG bo位点的下游基因的转录。对MRTF-A参与脑胶质细胞瘤分化进行研究,具有重要的基础理论研究意义和临床防治的现实价值。本论文利用细胞、分子生物学等技术,对MRTF-A参与脑胶质瘤细胞的分化进行研究。主要研究内容与结果如下利用免疫荧光和RT-PCR法,证实分离获得的细胞表达神经胶质细胞标志基因胶质纤维酸性蛋白(GFAP),说明分离获得的细胞为大鼠脑神经胶质细胞。我们分别提取正常大鼠胶质细胞与大鼠脑胶质瘤细胞(C6细胞)的mRNA和蛋白,进行RT-PCR和Western blotting,检测其中MRTF-A、Egr-1、GFAP和Ki67(细胞增殖抗原)基因的mRNA和蛋白表达水平,结果发现,与正常胶质细胞相比,脑胶质瘤细胞高表达Ki67,低表达MRTF-A、Egr-1、GFAP。利用含有5个CArG box位点的Egr-1启动子的荧光素酶报告基因质粒,在COS-7细胞和C6细胞中进行荧光素酶报告活性分析,结果发现MRTF-A可以显著转录激活Egr-1启动子。在脑胶质瘤细胞中过表达MRTF-A,利用形态观察、免疫细胞化学法、RT-PCR和Western blotting等方法研究转录因子MRTF-A对脑胶质瘤细胞分化的影响。结果发现MRTF-A可以显著增加脑神经胶质细胞的分化标志基因GFAP的表达,抑制细胞增殖抗原Ki67的表达。这些结果说明MRTF-A可以诱导脑神经细胞分化。并且在MRTF-A诱导脑胶质瘤细胞分化的过程中Egr-1的表达增加,说明Egr-1参与MRTF-A诱导的脑胶质瘤细胞的分化过程。我们利用ATRA诱导脑胶质瘤细胞分化和凋亡的研究模型研究MRTF-A对神经细胞的保护作用。MTT实验结果显示MRTF-A可以显著增加胶质细胞的存活率,具有保护分化细胞免于死亡的作用。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-6
目录  6-8
1 前言  8-23
  1.1 脑胶质瘤的概况  8-10
    1.1.1 脑胶质瘤的简介  8
    1.1.2 脑胶质瘤的特征  8-9
    1.1.3 脑胶质瘤的病因  9
    1.1.4 脑胶质瘤细胞  9
    1.1.5 脑胶质瘤的危害  9-10
  1.2 MRTF-A及其与脑胶质瘤的关系  10-16
    1.2.1 MRTF-A和MRTFs简介  10-11
    1.2.2 MRTF-A的表达模式  11
    1.2.3 MRTF-A的结构特点  11-14
    1.2.4 MRTF-A与肿瘤等疾病的关系  14-15
    1.2.5 MRTF-A与脑胶质瘤细胞分化的关系  15-16
  1.3 Egr-1  16-19
    1.3.1 Egr-1概况  16
    1.3.2 Egr-1的表达  16
    1.3.3 Egr-1基因定位  16-17
    1.3.4 Egr-1的特点  17
    1.3.5 Egr-1与其信号通路  17
    1.3.6 Egr-1与细胞分化的关系  17-19
    1.3.7 Egr-1与脑胶质瘤细胞分化的关系  19
  1.4 ATRA与脑胶质瘤细胞分化的关系  19-20
  1.5 本论文的研究意义及主要研究内容  20-23
    1.5.1 研究目的及意义  20-21
    1.5.2 研究的主要内容  21-23
2 材料与方法  23-45
  2.1 实验材料  23-28
    2.1.1 实验动物、质粒和细胞  23
    2.1.2 实验试剂  23-25
    2.1.3 实验仪器  25-26
    2.1.4 主要溶液的配置  26-28
  2.2 实验方法  28-45
    2.2.1 SD新生大鼠脑神经胶质细胞的分离培养与纯化  28-29
    2.2.2 C6细胞的复苏与培养  29-31
    2.2.3 逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)  31-35
    2.2.4 质粒的大提制备  35-36
    2.2.5 细胞转染  36-37
    2.2.6 荧光素酶(luciferase)活性检测  37-39
    2.2.7 免疫细胞化学  39-40
    2.2.8 细胞蛋白的提取  40-41
    2.2.9 Western blot(蛋白质免疫印迹)  41-43
    2.2.10 MTT方法  43-44
    2.2.11 统计分析方法  44-45
3 结果与讨论  45-64
  3.1 新生SD大鼠脑神经胶质细胞的分离纯化  45-47
  3.2 复苏与培养C6细胞  47-49
  3.3 C6与R-PG中GFAP、Ki67、MRTF-A和Egr-1的表达情况  49-53
  3.4 MRTF-A激活Egr-1启动子转录活性的研究  53-57
  3.5 MRTF-A诱导C6分化  57-61
    3.5.1 MRTF-A对C6细胞的形态学影响  57-58
    3.5.2 免疫化学方法验证MRTF-A可上调GFAP蛋白的表达  58-59
    3.5.3 MRTF-A促进GFAP的mRNA水平、降低Ki67的mRNA水平  59-60
    3.5.4 MRTF-A升高GFAP的蛋白水平、降低Ki67的蛋白水平  60-61
  3.6 MRTF-A激活Egr-1诱导脑胶质瘤细胞分化的研究  61-62
    3.6.1 在MRTF-A诱导脑胶质瘤细胞分化过程中Egr-1mRNA水平升高  61
    3.6.2 在MRTF-A诱导脑胶质瘤细胞分化过程中Egr-1蛋白水平升高  61-62
  3.7 MRTF-A对分化的脑胶质瘤细胞存活的影响  62-64
4 结论  64-65
5 展望  65-66
6 参考文献  66-74
7 攻读硕士学位期间发表论文情况  74-75
8 致谢  75

MRTF-A参与诱导脑胶质瘤细胞分化的研究

内容摘要

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