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维生素D除了经典的调节钙、磷代谢的作用外,另有研究发现其与免疫系统、细胞的分化增殖以及其它内分泌腺体之间有重要的关系,低维生素D水平与肥胖及其引起的代谢综合征间存在相关性,也有人研究证明维生素D对鼠的脂肪细胞的增殖分化存在影响,故推断维生素D与肥胖存在关联,但结论尚不统一。维生素D对人大网膜脂肪细胞及单纯性肥胖儿童脂源性激素水平是否有影响,目前尚不明确。目的1通过体外细胞实验探讨1,25二羟维生素D[1,25(OH)2VitD]对人大网膜脂肪细胞增殖分化的影响及其对人脂肪细胞脂联素、瘦素表达的影响。2观察单纯性肥胖儿童与健康对照儿童血25羟维生素D[25(OH)VitD],脂联素、瘦素水平的差异,通过前瞻性干预观察维生素D对单纯性肥胖儿童血25(OH)VitD、脂联素、瘦素及相关指标水平的影响。方法体外研究：1)原代分离培养人大网膜前脂肪细胞,前脂肪细胞诱导分化为脂肪细胞,以细胞生长曲线及MTT法观察1,25(OH)2VitD对细胞增殖的影响。2)采用含胰岛素、地塞米松与IBMX的分化培养基诱导分化人大网膜前脂肪细胞,用油红0染色及甘油三酯定量分析法观察1,25(OH),VitD对人大网膜脂肪细胞分化的影响。通过免疫组化和Western blot两种方法检测脂联素、瘦素表达及1,25(OH)2VitD对其的影响。临床研究：1)病例对照研究：收集单纯性肥胖儿童46例对照组为年龄、性别与肥胖组基本配对的健康儿童46例,年龄6-14岁。测量人体测量学指标的同时测定生化指标及血25(OH)VitD、瘦素,脂联素水平,比较单纯性肥胖患儿与对照儿童生化指标及血25(OH)VitD、瘦素,脂联素水平的差异,了解该组人群肥胖与25(OH)VitD,脂联素,瘦素是否存在相关性。2)前瞻性干预研究：所有肥胖儿童除采用饮食控制、加强运动外,均接受维生素D治疗,3个月后复查,并进行治疗前后体重指数、一般生化指标、血25(OH)VitD、瘦素,脂联素水平的分析比较。结果体外实验：原代培养的人大网膜前脂肪细胞,前脂肪细胞逐渐分化为内含反光脂滴的脂肪细胞。经油红0染色后证实为脂肪细胞。经统计分析结果显示在脂肪细胞增殖过程中不同浓度1,25(OH)2VitD对体外培养增殖的大网膜脂肪细胞数及MTT比色0D值没有影响(P>0.05)。在脂肪细胞分化过程中,10-8M、10-10M1,25(OH)2VitD浓度组的细胞内脂滴较多,10-4、10-6浓度处理组细胞内脂滴明显减少,1,25(OH)2VitD是以剂量依赖的方式抑制人大网膜脂肪细胞的分化；1,25(OH)2VitD浓度为10-4M,10-6M干预组甘油三酯浓度明显低于分化组对照组(P<0.05)。10-8M,10-10M干预组甘油三酯浓度为与分化组比较无明显差别(P>0.05),提示1,25(OH)2VitD对脂肪细胞分化有剂量依赖性抑制作用。免疫组化结果显示,脂联素主要在细胞浆内弥漫性表达,瘦素主要在细胞浆内表达。未分化组瘦素也有少量表达,western blot结果显示分化组脂联素,瘦素表达水平明显高于未分化组,而10-4,10-6,10-8浓度的1,25(OH)2VitD对分化的脂肪细胞脂联素,瘦素表达水平低于分化组差异具有统计学意义(P<0.05)。临床研究：单纯性肥胖儿童体重指数,瘦素均高于健康对照组儿童差异有显著性(P<0.05),而25(OH)VitD,脂联素低于健康对照组,差异有显著性(P<0.05)；同时血糖,胆固醇,甘油三酯等在两族间无显著性差异(P>0.05)。多元逐步回归分析结果表明与体重指数相关的因素依次是25(OH)VitD,脂联素,瘦素。体重指数与瘦素成正相关,25(OH)VitD,脂联素与其成负相关。予维生素D治疗3个月后,单纯性肥胖儿童BMI,甘油三酯,胆固醇,血糖均有所下降,但没有显著性(P>0.05),表明维生素D对于血脂,血糖,及体重指数无明显改善；同时,经维生素D治疗,单纯性肥胖儿童的25(OH)VitD及脂联素水平明显升高,差异有显著性(P<0.05),瘦素也有所增高但差异没有显著性(P>0.05)。结论1,25(OH),VitD剂量依赖性的抑制脂肪细胞的分化,但对于脂肪细胞的增殖没有影响,1,25(OH),VitD剂量依赖性的抑制分化过程中人大网膜脂肪细胞脂联素,瘦素的表达。肥胖儿童存在低维生素D水平和脂源性激素分泌异常,给予肥胖儿童一定量的维生素D可以保证维生素D的供给同时可以改善脂源性激素分泌情况。
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