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体外化疗富集卵巢癌肿瘤干细胞样细胞的模型的建立及其干细胞特性的研究

作　者: 赵喆
导　师: 沈铿
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: 卵巢癌侧群细胞肿瘤干细胞干性基因化疗耐药性
分类号: R737.31
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

背景肿瘤细胞的组成具有异质性,其中占很少比例的肿瘤细胞具有分化潜能、高致瘤性与自我更新的能力,被称为肿瘤干细胞。乳腺癌的研究表明,肿瘤干细胞可以通过化疗进行富集,因此成为继SP分选、球培养、表面标记物筛选后新的肿瘤干细胞富集方法。目的1.建立体外顺铂化疗富集卵巢癌干细胞的方法和模型;2.探讨能否通过化疗富集得到卵巢癌干细胞样细胞;3.研究SP细胞的干性基因表达、耐药性等特性。方法检测5株人卵巢癌细胞系,分选其中2株含有侧群细胞(SP)的细胞系中的侧群(SP)及非侧群(NSP)细胞,检测其耐药性、耐药相关基因、干性基因表达、体内及体外成瘤性能。建立通过体外顺铂化疗,富集卵巢癌细胞系内的侧群细胞的模型。结果(1)部分卵巢癌细胞系内含有SP细胞。(2)SP对多种化疗药物的耐药性强于NSP细胞。(3)SP细胞耐药性基因表达同NSP细胞有明显差异,且耐药性基因表达谱随细胞系不同而不同。(4)SP细胞在细胞周期上同NSP细胞有差异,存在更多的静止期(GO-G1期)细胞。(5)SP细胞Klf4、Oct-4干性基因表达水平上同NSP细胞有明显差异。(6)体外单次、间断顺铂化疗可以富集卵巢癌细胞系中的SP细胞。(7)被化疗富集的SP细胞在停药之后可以向NSP细胞分化,其比例有所下降。结论卵巢癌细胞系中SP细胞表现出了一部分干细胞养细胞的特性,顺铂体外化疗可以富集SP细胞。

全文目录

中文摘要  5-6
Abstract  6-7
缩略词注释表  7-8
前言  8-10
实验材料  10-13
第一部分卵巢癌细胞系内侧群细胞的检验  13-20
  实验方法  13-14
    1、Hoechst染色法  13
    2、细胞培养基本操作  13-14
  实验结果  14-19
    1、Hoechst染色方法中Hoechst33342浓度的确定  14-15
    2、Hoechst染色法中阻断剂的种类及其浓度的确定  15-17
    3、卵巢癌细胞系SKOV-3、A2780、OVCAR-3、H8910、ES-2中侧群(SP)细胞的检测  17-19
  小结  19-20
第二部分：OVCAR-3、H-8910细胞系中SP细胞的生物学检测  20-47
  实验方法  20-26
    1、SP与NSP的增殖情况  20
    2、SP与NSP的平板克隆形成实验  20-21
    3、SP与NSP的BALB\C nu雌性小鼠有限稀释成瘤实验  21
    4、SP与NSP对于顺铂、紫杉醇、米托蒽醌、多柔比星的耐药程度  21-23
    5、SP与NSP细胞的ABC超家族基因转录的检测  23-25
    6、SP与NSP细胞的细胞周期检测  25
    7、SP与NSP细胞的干性基因的转录  25-26
  实验结果  26-46
    1、SP与NSP的增殖情况  26-27
    2、SP与NSP的平板克隆形成实验  27-30
    3、SP与NSP的BALB\Cnu雌性小鼠有限稀释成瘤实验  30
    4、SP与NSP对于顺铂、紫杉醇、米托蒽醌、多柔比星的耐药程度  30-35
    5、SP与NSP细胞的ABC超家族基因转录的检测  35-42
    6、SP与NSP细胞的细胞周期检测  42-43
    7、SP与NSP细胞的干性基因的转录  43-46
  小结  46-47
第三部分顺铂体外化疗富集OVCAR-3、H8910细胞系中SP细胞模型的建立  47-51
  实验方法  47-48
    1、单次体外化疗后SP比例的变化及回归  47
    2、间断体外化疗后SP比例的变化  47-48
  实验结果  48-50
    1、单次体外化疗后SP比例的变化及回归  48-49
    2、间断体外化疗后SP比例的变化  49-50
  小结  50-51
实验讨论  51-55
总结  55-56
参考文献  56-57
综述  57-61
  参考文献  59-61
致谢  61

体外化疗富集卵巢癌肿瘤干细胞样细胞的模型的建立及其干细胞特性的研究

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