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膀胱上皮肿瘤尿液差异蛋白的筛选

作　者: 吴昕
导　师: 李汉忠
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: 膀胱肿瘤蛋白质组学 SELDI H4 疏水芯片聚类分析
分类号: R737.14
类　型: 博士论文
年　份: 2009年
下　载: 7次
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内容摘要

背景：膀胱肿瘤(Bladder Cancer, BC)是泌尿生殖系统的常见肿瘤,在我国的发病率逐年提高,且有年轻化的趋势。导致膀胱肿瘤的原因很复杂,目前比较认可的有：长期接触芳香胺类化学药物、膀胱的局部刺激、某些药物的滥用、盆腔放疗、吸烟等。基因层次的研究,也发现了ras、HER-2/neu、c-myc等癌基因,p53、RB1等抑癌基因都可能是膀胱肿瘤的致病原因。其最常见的初始症状是无症状性肉眼血尿,随着肿瘤的增大、增多与浸润,间歇性血尿可转为持续性血尿。目前针对膀胱肿瘤的诊断手段多种多样,但是都存在着各自的缺陷。尿液细胞学检查对于分级低的膀胱肿瘤敏感性较低,且检查结果往往对检查者的技术水平有较大的依赖性。膀胱镜检查可以在直视下直接观察肿瘤的形态、大小等,可以取活检组织,但是对设备依赖性较大,且创伤性较大。常用的影像学检查方法共同的优点是具有无创性,但对小肿瘤或是表浅肿瘤等显示不佳。而对于肿瘤标记物的寻找,更是结论丰富。NMP22、 SurVivin、UBC、端粒酶、p27蛋白、VEGF等等各种标记物都对膀胱肿瘤具有一定的诊断价值,但都在特异性或敏感性等方面存在缺陷,因此没有一个公认的标准。近年来,随着蛋白质组学技术的发展与成熟,以及其在肿瘤研究方面独特的优越性,很多学者开始通过这种途径来寻找膀胱肿瘤的标记物,并且已经发现了CRT、 UBC1-5、角蛋白、MRP8、MRP14、银屑素等多种物质在膀胱肿瘤患者体内呈现独特的表达方式,揭示出了利用蛋白质组学技术来寻找膀胱肿瘤标记物的可观前景。本课题通过利用SELDI质谱技术,寻找能够在膀胱肿瘤的早期诊断中发挥作用的标记蛋白,以期能够为临床应用提供一种可能的且具有无创性的诊断方法。目的：1.筛选膀胱肿瘤患者与对照组成员尿液样本中峰值存在着明显差异的蛋白质分子。2.利用膀胱肿瘤患者与对照组成员尿液样本中蛋白质分子峰值的差异,建立膀胱肿瘤的诊断筛选模型。方法：1.采集膀胱肿瘤患者、非肿瘤的泌尿系统其它疾病患者以及健康志愿者的晨起二次尿标本。2.采用美国BIORAD公司生产的H4疏水芯片及SELDI质谱仪测定所有尿液样本中的蛋白质分子峰值。使用Ciphergen Protein Software3.2.1显示读取的蛋白质分子峰值图示。3.使用SPSS16.0统计软件对读取的蛋白质分子峰值结果进行统计学分析。P<0.05认为存在明显统计学差异。4.使用BPS对上述所得结果进行聚类分析,建立膀胱肿瘤的诊断筛选模型。结果：1.本实验中膀胱肿瘤患者的临床特点：共有38例膀胱肿瘤患者进入实验组,最小年龄35岁,最大年龄88岁,中位年龄68.5岁,其中60岁以上的患者占了73.7%。其中男性27例,女性11例,男：女=2.5：1。术后病理明确为高级别肿瘤的有17例,低级别的有19例,未明确高低级别的有2例。2. SELDI质谱仪读取样本蛋白质分子峰值的结果：设置Ciphergen Protein Software3.2.1显示的最小分子量为1000,最大分子量为50000,信噪比≥5,蛋白最低出现比率5%,可以分析得到共214个可读点。3.使用SPSS16.0统计软件得到的统计结果：对所有的214个可读点进行正态分布检验,发现其中90个点所代表的蛋白质分子峰值在所有样本中呈现正态分布,余124个点所代表的蛋白质分子峰值在所有样本中不呈现正态分布。对所有符合正态分布的数据进行T检验分析,共发现分子量为1712.263、1896.238、2228.543、2464.589、2977.719和4792.879的6个蛋白质峰值在实验组与对照组之间存在显著差别,均符合P<0.05。对所有不符合正态分布的数据进行非参数Mann-WhitneyU检验分析,共发现分子量为1877.678、2212.175、2578.946、2847.638、3249.263、3385.764、4129.112、13304.09、15108.4、16652.69、22197.04和33354.89的12个蛋白质峰值在实验组与对照组之间存在显著差别,均符合P<0.05。4.使用BPS建立膀胱肿瘤诊断筛选模型的结果：利用上述18个峰值在实验组与对照组之间存在显著差异的蛋白,对所有的样本进行聚类分析。发现当依次选用2464.589、1896.238、1877.678、2977.719和2847.638等5个蛋白质的峰值作为分组结点建立诊断筛选模型时,可以将实验组与对照组按照最高的正确率区分开来。5.图形分析的结果：使用Ciphergen Protein Software3.2.1,选择上述诊断筛选模型中的分子量为2464.589的蛋白质作为示例,分别用线型图和凝胶模拟图观察实验组和对照组图形中的差别。发现在线型图中实验组与对照组在分子量为2464.589的蛋白点上存在峰值高低的明显差异,而凝胶模拟图中两组在相同的蛋白点上存在蛋白电泳痕迹的明显差异。结论：1.采用H4疏水芯片,通过SELDI质谱仪的技术可以很好地捕获尿液中的蛋白分子,特别是低分子量范围内的蛋白质。2.膀胱上皮肿瘤患者与对照组成员的尿液样本中的蛋白质分子峰值存在统计学上的显著差异,并且可以利用这种差异建立起膀胱上皮肿瘤的诊断筛选模型。

全文目录

缩略词表  4-5
中文摘要  5-8
ABSTRACT  8-11
前言  11-15
研究对象与方法  15-17
结果  17-27
讨论  27-41
结论  41-42
参考文献  42-47
综述  47-52
  参考文献  50-52
附录  52-66
致谢  66

膀胱上皮肿瘤尿液差异蛋白的筛选

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