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自分泌运动因子在肾细胞癌和膀胱癌中的表达及临床意义

作　者: 徐爱华
导　师: 陈汉春
学　校: 中南大学
专　业: 生物学
关键词: 自分泌运动因子肾细胞癌膀胱癌溶血磷脂酶D活性
分类号: R737.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：Autotaxin (ATX)广泛表达于正常组织和肿瘤组织中以及多种生物体液中,参与多种生理和病理过程,近年来ATX的结构与功能得到了较为广泛的研究。为了进一步了解ATX在肾细胞癌和膀胱癌发生发展中的作用,本研究探讨ATX在肾细胞癌和膀胱癌的表达及其临床意义,有可能为肾细胞癌和膀胱癌的早期诊断及治疗提供理论依据。方法：选取肾细胞癌70例、膀胱癌标本43例及其相应的癌旁正常组织作为研究对象,采用免疫组化SABC法检测ATX在不同病理类型的肾细胞癌、膀胱癌及其相应癌旁正常组织中的表达水平,运用Image-Pro Plus6.0图像分析软件测定免疫组化图像的累积光密度值,结合临床病理数据,分析其与肾细胞癌、膀胱癌临床病理特征之间的关系。采用Western Blot检测在肾细胞癌组织、膀胱癌组织以及相对应的癌旁正常组织中ATX蛋白的水平表达,以β-actin作为内参照,应用压片法对化学发光胶片进行信号检测。同时收集肾细胞癌、膀胱癌患者和正常人的外周血血清标本分别为56例、53例、60例,采用ELISA法检测正常人和肾细胞癌、膀胱癌患者的外周血血清中ATX的蛋白表达水平。利用LPC作为底物,ATX催化反应释放出胆碱,定量检测正常人和肾细胞癌、膀胱癌患者外周血血清内LysoLPD酶活性。结果：1、免疫组织化学研究结果显示：相对于肾细胞癌癌旁正常组织,ATX在肾细胞癌组织中高表达,ATX在癌旁正常组织和癌组织中的累积光密度值分别是13158.77±4016.40和17079.28±3544.62,两组间差异有统计学意义(P<0.05), ATX在不同病理类型肾细胞癌的表达差异没有统计学意义(p>0.05),但是随着临床分期及病理分级的增高,ATX蛋白的表达呈递增趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)；与患者性别、年龄和肿瘤大小各组无明显差异,无统计学意义(P>0.05)。同样,相对于膀胱癌旁正常组织,ATX蛋白在膀胱癌组织中呈高表达,累积光密度值分别为8952.63±1213.54和10833.41±1782.76,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。2、Western Blot检测结果显示：ATX蛋白在肾细胞癌、膀胱癌及其相应癌旁正常组织中均有表达,大约在100kDa左右位置可见清晰条带。在肾细胞癌癌组织和癌旁正常组织中ATX条带灰度值为分别为65.56%±12.26%和46.74%±10.99%,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。在膀胱癌癌组织及癌旁正常组织中ATX条带灰度值为51.77%±10.32%和41.05%±8.02%,ATX蛋白表达量的差异有统计学意义(P<0.05)。3、ELISA检测外周血血清中ATX浓度结果显示,在正常人组、肾细胞癌组、膀胱癌组血清中ATX蛋白浓度分别为257.94±60.64ng/ml、276.65±54.32ng/ml、268.27±44.07ng/ml,虽然肾细胞癌组、膀胱癌组ATX浓度略高于正常人对照组,但该差异不具有显著统计学意义(p>0.05)。4、肾细胞癌组、膀胱癌组和正常人对照组外周血血清中LysoPLD活性分别为2.89±1.30nmol/(ml.min)、2.84±1.81nmol/(ml.min)、2.52±1.71nmol/(ml.min),与正常人对照组相比,膀胱癌组、肾细胞癌组中LysoPLD活性均有上升,但是差异不具有统计学意义(p>0.05)。结论：1、相对于肾细胞癌、膀胱癌癌旁正常组织,ATX蛋白水平在肾细胞癌、膀胱癌癌组织中高表达,提示ATX蛋白与肾细胞癌、膀胱癌的发生、发展有密切关系。2、ATX与肾细胞癌的临床分期、病理分级呈正相关,但是与年龄、性别、肿瘤大小等临床特征无相关性。ATX蛋白表达水平与肾细胞癌的恶性程度有关。3、肾细胞癌、膀胱癌患者相对于正常人的外周血血清中LysoLPD活性和ATX蛋白浓度虽有上升趋势,但是差异不显著。提示ATX与肾细胞癌、膀胱癌的早期诊断有关。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-11
缩略词汇表  11-12
1 绪论  12-17
  1.1 ATX结构  12-13
  1.2 ATX的体内分布  13-14
  1.3 肾细胞癌与膀胱癌的研究现状  14
  1.4 选题思路  14-16
  1.5 实验技术路线  16-17
2 材料与方法  17-25
  2.1 材料  17-19
    2.1.1 收集样本  17
    2.1.2 标本处理  17
    2.1.3 主要试剂  17-19
    2.1.4 主要仪器  19
  2.2 方法  19-25
    2.2.1 石蜡切片制备  19-20
    2.2.2 组织切片HE染色  20
    2.2.3 免疫组化法检测ATX的表达水平  20
    2.2.4 Western Blot检测ATX表达差异  20-22
    2.2.5 ELISA检测血清中ATX含量  22-23
    2.2.6 正常人与肾细胞癌、膀胱癌外周血血清LysoPLD活性测定  23-24
    2.2.7 免疫组化结果判断  24
    2.2.8 统计学分析  24-25
3 结果  25-36
  3.1 肾细胞癌、膀胱癌术后病理诊断  25-27
    3.1.1 HE染色鉴定肾细胞癌组织和癌旁正常组织  25-26
    3.1.2 HE染色鉴定膀胱癌组织和癌旁正常组织  26-27
  3.2 免疫组织化学染色结果  27-31
    3.2.1 免疫组织化学染色检测ATX在肾细胞癌和癌旁正常组织的表达  27-28
    3.2.2 ATX免疫组化IOD值与RCC的关系  28
    3.2.3 肾细胞癌中ATX蛋白表达水平与临床特征的关系  28-30
    3.2.4 免疫组织化学染色ATX在膀胱癌组织及癌旁正常组织的表达  30-31
    3.2.5 ATX免疫组化lOD值与膀腕癌的关系  31
  3.3 Western Blot验证ATX蛋白的表达差异  31-33
    3.3.1 ATX蛋白在肾细胞癌组织和癌旁正常组织表达差异  31-32
    3.3.2 ATX蛋白在膀胱癌癌组织和癌旁正常组织表达差异  32-33
  3.4 正常人与肾细胞癌、膀胱癌患者外周血血清中ATX蛋白表达结果  33-34
  3.5 正常人与肾细胞癌、膀胱癌患者外周血血清LysoPLD活性测定结果  34-36
4 讨论  36-39
  4.1 ATX在血液中的表达  36-37
  4.2 ATX在肿瘤组织中的表达  37-38
  4.3 不足与展望  38-39
5 结论  39-40
参考文献  40-44
综述  44-54
  参考文献  50-54
硕士期间主要研究成果  54-55
致谢  55

自分泌运动因子在肾细胞癌和膀胱癌中的表达及临床意义

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