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乳腺癌高转移亚克隆的筛选及转移相关基因的研究

作　者: 潘秀华
导　师: 冯玉梅
学　校: 天津医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 乳腺癌转移亚克隆骨诱导因子整合素β样因子1 mRNA表达
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

背景：肿瘤的侵袭和转移是恶性肿瘤最基本的生物学特性之一,也是肿瘤患者死亡的重要原因。转移相关基因和分子标志物的筛选、转移机制的研究、抗转移药物的开发和生物治疗的探索都需要大量体内和体外的实验研究。因此具有高转移生物学行为的细胞系和动物转移模型是必不可少德实验工具。依据肿瘤异质性理论,可以从同一肿瘤亲代中分离出转移潜能不同的细胞亚克隆,对于筛选肿瘤转移相关基因和研究肿瘤转移机制具有重要意义。乳腺癌的转移和复发是乳腺癌患者死亡的重要原因,也是乳腺癌临床治疗的难题。乳腺癌的转移是极复杂的多步骤序贯过程,是众多因子相互协调及共同作用的结果。本课题组在前期筛选乳腺癌转移相关基因的研究中,发现骨诱导因子(osteoglycin, OGN)和整合素β样1(Integrin beta-like1, ITGBL1) mRNA表达在转移癌中较其配对的原发癌下调,是潜在的转移相关基因。目的：分离高转移潜能的人乳腺癌细胞MDA-MB-435S的亚克隆,为研究人类乳腺癌转移机制提供实验对象；通过大样本量的临床病例分析OGN和ITGBL1的mRNA表达与乳腺癌发生、发展和转移的关系,并探讨其作为分子诊断和预后标志物的价值。方法：通过有限稀释方法分离不同转移潜能的人乳腺癌细胞亚克隆；采用细胞生物学方法体外评价亚克隆的增殖和侵袭转移潜能：克隆形成实验评价细胞克隆形成能力,生长曲线测定细胞的群体倍增时间和增殖能力,流式细胞术检测细胞周期状态,粘附实验评价细胞的异质粘附能力,通过迁移实验评价细胞的运动能力,侵袭小室实验评价细胞的侵袭能力,通过乳腺脂肪垫接种免疫双缺陷鼠验证体外筛选克隆的体内转移能力；采用实时定量RT-PCR方法检测16例癌旁正常组织、108例乳腺原发癌组织和其中30例的淋巴结转移癌中OGN和ITGBL1的mRNA表达水平,分析OGN和ITGBL1在乳腺不同病变组织中的表达状态及其与临床病理因素的关系。结果：通过对52株MDA-MB-435S细胞亚克隆的体外侵袭能力评价筛选得到高转移亚克隆14-E5。14-E5体积比亲代小,呈多边形,触角增多,与亲代MDA-MB-435S的梭形、伪足较长明显不同；克隆形成能力、运动能力、侵袭能力、体内自发转移能力较亲代明显增强；S期和G2/M期细胞比例比亲代降低,增殖能力比亲代降低；细胞群体倍增时间与亲代无明显差别,异质粘附能力,成瘤率与亲代无明显差别。OGN和ITGBL1的mRNA在乳腺原发癌中的表达均较配对的癌旁正常乳腺组织下调(P<0.05); OGN和ITGBL1的mRNA在乳腺转移癌中的表达均较配对原发癌下调(P<0.05)。正常乳腺、乳腺原发癌和淋巴结转移癌组间比较发现,OGN和ITGBL1在正常乳腺、乳腺原发癌和淋巴结转移癌中表达依次下调,并且两者在原发癌与癌旁正常组织、原发癌与转移癌中的表达差异均有显著性(P<0.05)。乳腺原发癌中OGN和ITGBL1的mRNA表达与临床病理各因素分析：OGN mRNA表达与患者年龄呈负相关(χ2=8.0920,P=0.004),ITGBL1mRNA表达与雌激素受体状态相关,两者与肿瘤大小、临床分期、组织学分级和淋巴结状态等其它临床病理因素无关。Kaplan-Meier生存分析结果提示乳腺癌患者总体病例的OGN和ITGBL1的mRNA表达量均与患者的3年无转移生存期无相关性,在淋巴结阳性病例中ITGBL1mRNA低表达组预后较差(P=0.047)。结论：筛选到高转移潜能的人乳腺癌细胞亚克隆14-E5,为研究乳腺癌转移机制、抗转移药物的研发和评价抗转移实验性治疗疗效提供较好的实验工具。本研究结果表明OGN和ITGBL1的表达与乳腺癌转移相关,可能在乳腺癌转移中起重要作用,ITGBL1还是预测淋巴结阳性患者预后和判断抗雌激素药物敏感性的指标。

乳腺癌高转移亚克隆的筛选及转移相关基因的研究

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