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原发性干燥综合征Th17细胞研究
作 者: 吴琛
导 师: 赵岩
学 校: 北京协和医学院
专 业: 临床医学
关键词: Th17细胞 IL-17A IL-6 IL-1β IL-17A mRNA IL-17F mRNA
分类号: R593
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 21次
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内容摘要
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背景：原发性干燥综合征(primary Sjogren’s syndrome, pSS)是一种以淋巴细胞浸润、外分泌腺功能障碍导致口干、眼干为特征的慢性自身免疫性疾病,对参与其中的Th17细胞作用的定义可为治疗干预提供证据。Th17细胞是一种不同于Thl和Th2细胞的新T辅助细胞亚群,以分泌IL-17A和IL-17F等细胞因子为特征,能募集和激活中性粒细胞,并参与自身免疫和炎性疾病的发病。目的：探讨Th17细胞及其相关细胞因子在原发性干燥综合征患者外周血中的水平及它们与临床指标的相关性。方法：受试者为根据2002欧美共识小组(American-European Consensus Group, AECG)标准确诊的原发性干燥综合征患者87名、作为病例对照的根据1997美国风湿病协会(American College of Rheumatology, ACR)标准确诊的系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)患者9名和作为健康对照(healthy control,HC)的健康志愿者42名,其中未接受过或接受激素或免疫抑制治疗未满3个月的pSS患者归为初治pSS组,接受治疗3个月以上的归为经治pSS组。收集受试者外周血,提取血清测细胞因子IL-17A、IL-6、IL1β,提取外周血单个核细胞测Th17细胞和IL-17A mRNA、IL-17F mRNA表达水平,并结合年龄、病程、EULAR干燥综合征疾病活动指数(EULAR Sjogren’s Syndrome Disease Activity Index, ESSDAI)、灶性指数(focus score, FS)、血清IgG、gA、IgM、补体C3、补体C4、补体CH50、血ESR、hsCRP等临床指标进行分析。结果：1.pSS患者外周血Th17细胞占CD4+T细胞的比例(以下简称Th17细胞比例)较HC显著升高(1.65±1.18%vs1.22±0.71%,p<0.05)；较SLE患者升高,但无统计学差异(1.65±1.18%Vs1.44±0.87%,p=0.622)。初治pSS患者外周血Th17细胞比例较经治pSS患者升高,但未达到统计学差异(1.89±1.17%vs1.42±1.16%,p=0.082)。外周血Th17细胞比例与血hsCRP水平成正相关,r=0.711,p=0.021。2.pSS患者血清IL-17A水平较HC显著增高(2.34±3.54pg/ml vs0.39±0.65pg/ml,p=0.012)；较SLE患者增高,但未达到统计学差异(2.34±3.54pg/ml vs0.86±1.08pg/ml, p=0.347)。初治pSS患者与经治pSS患者的血清IL-17A水平差异很小(2.41±4.04pg/ml vs2.22±2.68pg/ml, p=0.889)。初治pSS患者血清IL-17A水平与血hsCRP水平成正相关,r=0.785,p=0.012。pSS患者血清IL-6水平较HC增高(6.79±8.76pg/ml1vs2.93±1.62pg/ml,p=0.182),较SLE患者增高(6.79±8.76pg/ml vs4.81±2.43pg/ml,p=0.450),但均未达到统计学差异。pSS患者血清IL-1β水平较HC增高(5.50±8.10pg/ml vs3.51±4.41pg/ml,p=0.352),未达到统计学差异；较SLE患者显著增高(5.50±8.10pg/ml vs1.28±1.60pg/ml,p=0.014)。3.pSS患者外周血单个核细胞IL-17A mRNA水平较HC增高,但未达到统计学差异(1.32±2.73vs0.37±0.28,p=0.559)；较SLE患者显著增高(1.32±2.73vs0.41±0.91,p=0.010)。初治pSS患者外周血单个核细胞IL-17A mRNA水平较经治pSS患者显著增高(1.74±3.26vs0.58±1.21,p=0.024)。pSS患者外周血单个核细胞IL-17F mRNA水平较HC增高(1.02±0.84vs0.66±0.91,p=0.234)；较SLE患者降低(1.02±0.84vs1.16±0.81,p=0.697),均未达到统计学差异。4.pSS患者外周血Th17细胞比例与血清IL-17A水平成正相关,r=0.433,p=0.027。ESSDAI评分与血IgG水平有正相关性(r=0.253,p<0.05),与外周血Th17细胞比例无相关性。结论：pSS患者外周血Th17比例、血清IL-17A水平均较HC显著增高,外周血单个核细胞IL-17A mRNA、IL-17F mRNA水平较HC增高。与经治pSS患者相比,初治pSS患者的外周血Th17细胞比例增高,血清IL-17A水平差异很小,外周血单个核细胞IL-17A mRNA水平显著增高。pSS患者外周血Th17比例、血清IL-17A水平、外周血单个核细胞IL-17A mRNA水平均较SLE患者升高。pSS患者血清IL-6、IL-1β水平均较HC和SLE患者增高。ESSDAI评分与血IgG水平有正相关性,与外周血Th17细胞比例无相关性。
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全文目录
中文摘要 4-6
Abstract 6-8
前言 8-10
实验材料 10-15
1. 实验对象 10
2. 实验试剂 10-12
3. 实验仪器及耗材 12-13
4. 试剂配制 13
5. 引物的设计合成 13-14
6. 软件 14-15
实验方法 15-26
1. 实验流程图 15
2. 外周血标本采集 15
3. 密度梯度离心法分离外周血单个核细胞 15-16
4. 流式细胞染色-Th17细胞 16-17
5. 血细胞总RNA的提取 17
6. 合成第一链cDNA 17-18
7. 实时荧光定量PCR(染料法) 18-19
8. ELISA测IL-17A 19-21
9. ELISA测1L-6 21-23
10. ELISA测IL-1β 23-25
11. 统计方法 25-26
结果 26-47
1. 受试者临床资料 26
2. 流式细胞术检测Th17细胞方法 26-28
3. Th17细胞结果 28-31
4. 血清IL-17A水平结果 31-34
5. 血清IL-6水平结果 34-36
6. 血清IL-1β水平结果 36-38
7. 外周血单个核细胞IL-17A、IL-17F mRNA结果 38-44
8. IL-17A的细胞水平、血清水平和mRNA水平之间的相关性 44-45
9. pSS患者ESSDAI评分与临床指标的相关性 45-47
讨论 47-51
结论 51-52
参考文献 52-55
综述 55-68
参考文献 62-68
附录一 原发性干燥综合征患者入选标准 68-69
附录二 ACR 1997年修订的SLE分类标准 69-70
附录三 EULAR干燥综合征疾病活动指数(ESSDAI) 70-73
附录四 英文缩略词表 73-75
致谢 75
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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 全身性疾病 > 免疫性疾病
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