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细菌偶联融合蛋白信号流式传导的研究

作　者: 闫磊
导　师: 兰文军
学　校:
专　业: 发酵工程
关键词: 金黄色葡萄球菌蛋白A 荧光染色流式细胞术液相芯片
分类号: R446.61
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

本研究利用荧光染色金黄色葡萄球菌，并通过基于金黄色葡萄球菌的流式免疫分析方法对急性早幼粒细胞白血病细胞中的PML-RARα融合蛋白进行了检测。课题采用的细菌是金黄色葡萄球菌，因为其细胞壁上有一种蛋白即金黄色葡萄球菌A蛋白(Staphylococal Protein A，SPA)，金黄色葡萄球菌蛋白A能与人的及许多其它动物的免疫球蛋白IgG结合的生物学特性。金葡菌蛋白A能与免疫球蛋白G的Fc段结合而不与其Fab段结合，所以不会影响IgG抗体的活性。因而可用含蛋白A的葡萄球菌作为载体，先对其进行荧光染色再结合特异性抗体，表面包被病理融合蛋白捕获抗体的SPA菌用于特异地捕获病理融合蛋白。分析时，生物素标记的报道抗体特异性识别捕获的融合蛋白，PE标记的链霉亲和素再结合报道抗体，流式细胞仪检测荧光强度，即可定量待检测的融合蛋白。实验中使用CFSE对金黄色葡萄球菌进行荧光染色,并对保存的已染色菌体进行流式细胞仪检测，结果显示: CFSE染色荧光强度稳定;用此检测系统可以特异的检测出PML/RARa融合蛋白，并有较高灵敏度。

全文目录

摘要  8-9
ABSTRACT  9-10
第1章绪论  10-20
  1.1 金黄色葡萄球菌蛋白 A 的介绍  10-11
  1.2 细胞生物传感器  11-15
    1.2.1 动物细胞传感器  11-12
    1.2.2 细菌细胞传感器  12-14
    1.2.3 酵母细胞传感器  14
    1.2.4 细菌细胞与酵母细胞组合细胞传感器  14-15
  1.3 急性早幼粒细胞白血病诊断诊断方法  15-17
    1.3.1 传统的染色体核型分析  15
    1.3.2 流式细胞术  15
    1.3.3 荧光原位杂交技术  15-16
    1.3.4 逆转录聚合酶链反应  16
    1.3.5 实时荧光定量 PCR 技术  16-17
    1.3.6 抗早幼粒细胞白血病蛋白单克隆抗体  17
    1.3.7 新型诊断试剂  17
  1.4 本课题立题的目的及意义  17-20
    1.4.1 研究价值及意义  17-18
    1.4.2 主要研究内容  18-20
第2章金黄色葡萄球菌的培养和菌种保藏  20-26
  2.1 实验药品与仪器  20-21
    2.1.1 实验药品  20-21
    2.1.2 实验仪器  21
  2.2 金黄色葡萄球菌的培养与保藏  21-24
    2.2.1 培养基配制  21
    2.2.2 冻干金黄色葡萄球菌菌株的恢复培养  21-22
    2.2.3 工作用菌的制备  22
    2.2.4 菌种的保藏  22-24
    2.2.5 结果与讨论  24
  2.3 本章小结  24-26
第3章金黄色葡萄球菌的染色  26-36
  3.1 实验药品及仪器  26-27
    3.1.1 实验药品  26-27
    3.1.2 实验仪器  27
  3.2 金黄色葡萄球菌的荧光染色  27-33
    3.2.1 细胞的荧光染色方法  27
    3.2.2 荧光染料的介绍  27-28
    3.2.3 菌悬液的准备与试剂配制  28-29
    3.2.4 CFSE 对细菌的荧光染色  29-30
    3.2.5 荧光染色结果与分析  30-31
    3.2.6 荧光染色时间对细菌染色的影响  31-33
  3.3 结果与讨论  33-34
  3.4 电镜下的金黄色葡萄球菌  34
  3.5 本章小结  34-36
第4章细菌微球流式免疫分析的验证  36-42
  4.1 实验药品与仪器  37-38
    4.1.1 实验药品  37
    4.1.2 实验仪器  37-38
  4.2 实验步骤  38-39
    4.2.1 检测捕获抗体的活性  38
    4.2.2 细菌微球流式免疫分析的验证  38-39
  4.3 结果  39-41
    4.3.1 检测捕获抗体的活性结果与分析  39-40
    4.3.2 流式免疫分析的验证结果与分析  40-41
  4.4 讨论  41-42
第5章检测系统的性能分析  42-54
  5.1 实验药品及仪器  43-44
    5.1.1 实验药品  43
    5.1.2 实验仪器  43-44
  5.2 实验步骤  44-46
    5.2.1 细胞核蛋白的提取  44
    5.2.2 芯片检测系统特异性分析  44-45
    5.2.3 芯片检测系统的分析灵敏度测定  45-46
    5.2.4 检测系统的精密度的测定  46
    5.2.5 检测系统的相关性分析  46
  5.3 结果  46-51
    5.3.1 芯片系统特异性检测结果与分析  46-47
    5.3.2 检测系统的分析灵敏度测定结果与分析  47-49
    5.3.3 检测系统的精密度的测定结果与分析  49-50
    5.3.4 检测系统的相关性结果与分析  50-51
  5.4 讨论  51-54
第6章结论与展望  54-58
  6.1 结论  54-56
    6.1.1 金黄色葡萄球菌的培养与保藏  54
    6.1.2 金黄色葡萄球菌的荧光染色  54-55
    6.1.3 细菌微球流式免疫分析的验证  55
    6.1.4 检测系统的性能分析  55-56
  6.2 创新点  56
  6.3 前景展望  56-58
参考文献  58-64
致谢  64-66
在学期间主要科研成果  66

细菌偶联融合蛋白信号流式传导的研究

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