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Ⅱ-Ⅲ级星型细胞瘤体外诱导耐药细胞—干细胞基因及耐药基因研究

作　者: 毛锦龙
导　师: 任祖渊
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: 星形细胞瘤尼莫司汀耐药基因脑肿瘤干细胞干细胞基因
分类号:
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：初步探讨脑胶质瘤细胞对烷化剂类抗肿瘤药物耐药产生的机理,在诱导产生耐药细胞的基础上,探讨在耐药形成的过程中,干细胞基因与耐药基因表达的变化,并尝试找到两者之间的关系,从而为个体化治疗提供依据。方法：星形细胞瘤细胞由北京大学医学部惠赠,使用含有100ug/ml尼莫司汀(ACNU)的培养基持续培养5代,撤药后得到耐药细胞,通过CCK-8法比较药物诱导前后肿瘤细胞对尼莫司汀耐受性的差异；使用CD133抗体标记,流式细胞仪分析诱导前后CD133阳性细胞数量的变化；用实时荧光定量PCR的方法检测干细胞基因OCT4、Sox2、Nestin,耐药基因MGMT、MDR1以及p53基因表达量的变化；采用甲基化特异性高分辨率热溶解法(MS-HRM)检测MGMT基因启动子区域甲基化水平变化。结果：在诱导之后,星形细胞瘤细胞在尼莫司汀中增殖活力强于对照,半数抑制浓度明显提高,对药物ACNU的耐受性增强；诱导前后的星形细胞瘤细胞中CD133阳性细胞比例分别为9.74%和0.49%,CD133阳性细胞数量明显减少；经过药物诱导后,Sox2、Nestin基因表达下调,OCT4基因的表达下调1.84倍,具有显著差异；MGMT基因表达上调56.6倍,具有极显著差异,MDR1基因表达量没有变化；两组细胞中,MGMT基因启动子甲基化水平均无明显变化。结论：通过大剂量烷化剂药物ACNU短期诱导的方法可以获得耐药细胞；该方法得到的耐药细胞中,干细胞基因的表达下降,耐药基因MGMT的表达明显升高；MGMT基因启动子甲基化水平与其表达水平之间并不平行。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
英文缩略词表  7-8
前言  8-9
一、细胞的培养和诱导  9-22
  材料与方法  9-15
  结果  15-21
  小结  21-22
二、耐药细胞CD133阳性细胞比例鉴定  22-26
  材料和方法  22-23
  结果  23-25
  小结  25-26
三、mRNA水平基因表达量检测  26-37
  材料和方法  26-29
  结果  29-36
  小结  36-37
四、MGMT基因启动子甲基化测定  37-42
  材料和方法  37-39
  结果  39-41
  小结  41-42
讨论  42-52
结论  52-53
参考文献  53-58
综述脑胶质瘤耐药机制中MGMT的作用  58-69
  参考文献  65-69
致谢  69

Ⅱ-Ⅲ级星型细胞瘤体外诱导耐药细胞—干细胞基因及耐药基因研究

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