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川芎嗪油基纳米给药系统的组织分布、体外吸收及抗AD脑损伤作用的评价

作　者: 马丽
导　师: 鲁传华
学　校: 安徽中医药大学
专　业: 药物化学
关键词: 川芎嗪油基纳米混悬剂组织分布 Caco-2细胞脑损伤
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

本论文首先在油包油非水川芎嗪微乳共性研究的基础上，通过对内相的改变，制备川芎嗪纳米混悬剂，并进行稳定性的初步研究。通过纳米混悬剂和片剂混悬剂在小鼠体内的组织分布中的研究发现，与片剂混悬剂相比，生物利用度得到了提高。通过MTT实验筛选川芎嗪在Caco-2细胞模型中进行细胞摄取实验的适宜浓度。经过对时间、温度、浓度、pH值和P-g抑制剂对Caco-2细胞摄取实验影响因素的考察，选择最优温度，时间和pH值，并发现Caco-2细胞对TMP的摄取量随着药物浓度的增加基本呈线性增加，不存在饱和现象，属于被动扩散。通过在大鼠海马组织处注射Aβ蛋白，造成大鼠AD的脑损伤模型。灌胃给药，多聚甲醛在体灌注，取出完整的脑组织。通过尼氏染色，直观的查看海马组织CA1区的形态特征进行判断，并与模型组对比TNF-α、NOS1和NF-kB在大鼠海马组织CA1区的表达比值，通过表达比值的大小直观判定抗AD大鼠脑损伤作用的效果。本文建立了血浆、心、肝、脾、肺、肾和脑组织以及Caco-2细胞中川芎嗪的高效液相色谱分析方法，并进行了方法学验证。我们比较了川芎嗪纳米混悬剂和川芎嗪水混悬剂在组织分布上的差别，同时也比较了其在Caco-2细胞模型进行摄取实验上的不同，以及比较了两者在抗AD大鼠脑损伤作用上的差别。

全文目录

中文摘要  11-12
ABSTRACT  12-14
英文缩略词表  14-15
前言  15-18
  1 研究背景  15-17
    1.1 川芎嗪及其制剂  15
    1.2 体外吸收机制研究的常见模型  15-16
    1.3 川芎嗪抗 AD 脑损伤模型的研究  16-17
  2 本课题设计思路  17-18
第一部分川芎嗪 O/O 纳米混悬剂的制备与组织分布的研究  18-34
  第一章川芎嗪 O/O 纳米混悬剂的制备  18-20
    1 实验材料  18
      1.1 仪器  18
      1.2 药品与试剂  18
    2 川芎嗪 O/O 纳米混悬剂的制备  18
    3 川芎嗪 O/O 纳米混悬剂理化性的研究  18-20
      3.1 透明度的检查  18-19
      3.2 动力学稳定性  19
      3.3 热力学稳定性  19
      3.4 粒径及其分布  19
      3.5 川芎嗪纳米混悬剂稳定性的初步研究  19-20
  第二章川芎嗪 O/O 纳米混悬剂的组织分布研究  20-32
    1 实验材料  20
      1.1 仪器  20
      1.2 药品与试剂  20
      1.3 实验动物  20
    2 方法  20-23
      2.1 标准品溶液配置  20-21
      2.2 色谱条件  21
      2.3 空白血浆和组织样品的制备  21
        2.3.1 空白血浆样品的制备  21
        2.3.2 空白组织样品的制备  21
      2.4 含标准品血浆和组织样品的制备  21-22
        2.4.1 含标准品血浆的制备  21
        2.4.2 含标准品组织样品的制备  21-22
      2.5 给药小鼠血浆和组织样品的制备  22
        2.5.1 给药小鼠血浆的制备  22
        2.5.2 给药小鼠组织样品的制备  22
      2.6 给药方法和生物样品的采集  22
      2.7 数据处理方法  22-23
    3 结果  23-32
      3.1 方法专属性的考察  23
      3.2 标准曲线的制备  23-25
      3.3 精密度试验  25-26
      3.4 回收率试验  26-27
        3.4.1 绝对回收率试验  26-27
        3.4.2 相对回收率试验（准确度实验）  27
      3.5 稳定性考察  27-28
      3.6 小鼠组织分布  28-30
        3.6.1 小鼠血浆的药-时曲线  28-29
        3.6.2 TMP 在小鼠各组织中的分布  29-30
      3.7 不同组织的药动学参数  30
      3.8 相对生物利用度计算  30-32
    4 讨论  32
  本部分小结  32-34
第二部分川芎嗪 O/O 纳米混悬剂在 Caco-2 细胞模型中摄取特性的研究  34-51
  1 实验器材  34-36
    1.1 样品的制备  34-35
    1.2 细胞株  35
    1.3 试剂与仪器  35-36
      1.3.1 主要试剂  35
      1.3.2 主要溶液配制  35-36
      1.3.3 主要仪器  36
  2 培养方法  36-39
    2.1 细胞培养条件  36
    2.2 新购细胞的培养  36-37
    2.3 细胞冻存  37
    2.4 细胞复苏  37
    2.5 细胞的传代培养  37-38
    2.6 细胞形态学观察  38
    2.7 细胞计数[31]  38
    2.8 TMP 纳米混悬剂供试品粒径测量的结果  38-39
  3 细胞毒性实验  39-41
    3.1 MTT 分析法原理  39-40
    3.2 实验步骤  40
    3.3 实验结果  40-41
  4 TMP 在 Caco-2 细胞模型上的摄取特性研究  41-42
    4.1 色谱条件  41
    4.2 建立 Caco-2 细胞模型  41
    4.3 考马斯亮蓝法测定细胞蛋白含量  41-42
    4.4 标准品溶液的配制  42
      4.4.1 川芎嗪标准溶液的配制  42
      4.4.2 标准蛋白质溶液的配制  42
      4.4.3 含标准品细胞样品的制备  42
      4.4.4 给药细胞样品的处理  42
    4.5 数据处理方法  42
  5 TMP 在 Caco-2 细胞模型上的摄取特性研究结果  42-49
    5.1 方法专属性的考察  42-43
    5.2 含药细胞标准曲线的制备  43-44
    5.3 提取回收率  44
    5.4 精密度与准确度  44
    5.5 细胞蛋白标准曲线的制备  44-45
    5.6 细胞蛋白含量的测定  45
    5.7 摄取实验  45-49
      5.7.1 时间对摄取的影响  45-46
      5.7.2 温度对摄取的影响  46
      5.7.3 浓度对摄取的影响  46-47
      5.7.4 pH 值对摄取的影响  47-48
      5.7.5 P-g 抑制剂对摄取的影响  48-49
  6 讨论  49-50
  7 本部分小结  50-51
第三部分川芎嗪 O/O 纳米混悬剂抗 AD 模型大鼠脑损伤作用的评价  51-61
  1 实验材料  51-52
    1.1 仪器  51
    1.2 试剂  51-52
    1.3 动物  52
  2 实验方法  52-54
    2.1 造模方法  52
    2.2 分组及给药  52-53
    2.3 学习记忆能力的测定  53
    2.4 海马区脑片的制备  53
    2.5 尼氏染色  53
      2.5.1 原理  53
      2.5.2 步骤  53
    2.6 免疫组化  53-54
      2.6.1 原理  53-54
      2.6.2 步骤  54
    2.7 数据处理  54
  3 实验结果  54-59
    3.1 水迷宫实验结果  54-55
    3.2 尼氏染色结果  55-56
    3.3 免疫组化指标结果  56-59
  4 讨论  59
  5 本部分小结  59-61
全文总结及展望  61-63
参考文献  63-67
综述  67-81
  References  75-81
附录  81-82
致谢  82

川芎嗪油基纳米给药系统的组织分布、体外吸收及抗AD脑损伤作用的评价

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