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芪味理肺汤治疗大鼠哮喘及对NF-κB抑制机制的研究

作　者: 李新辰
导　师: 白根本
学　校: 北京中医药大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 主题词 芪味理肺汤 支气管哮喘 IκBα NF-κB/p65
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要


目的：通过体内实验研究芪味理肺汤对支气管哮喘Sprague-Dawley(SD)大鼠的一般行为学,肺部炎症,肺组织中NF-KB/p65及IκBα表达相关指标的影响。评价芪味理肺汤对支气管哮喘SD大鼠模型的抗炎效果,探讨芪味理肺汤抑制支气管哮喘的机制。方法：通过OVA/Al(OH)3五点注射方法建立SD大鼠支气管哮喘模型。70只大鼠随机分为7组：正常对照组,模型组,阻断剂组,地塞米松组,芪味理肺汤高、中、低剂量组。OVA激发期间观察大鼠行为学特征。ELISA方法检测外周血IgE含量。光镜下对支气管肺泡灌洗液进行白细胞分类计数。取右肺中叶进行HE染色,光镜下观察炎症细胞浸润情况及肺泡面积。取右肺上叶进行Western Blot检测NF-KB/p65及IKBa蛋白的表达。取右肺下叶进行Real-Time PCR检测NF-KB/p65及IKBa mRNA表达。结果：1.BALF与空白对照组相比,模型对照组BALF中EOS计数显著升高(P<0.01)；阻断剂组EOS计数稍高,但P>0.05,差异无统计学意义；中药低、中、高剂量组EOS计数升高(P<0.01),且显示出量效关系；地塞米松组EOS计数升高(P<0.01)。与模型对照组相比,阻断剂组EOS计数较低(P<0.01),中药低、中、高剂量组EOS计数也低,但中药低剂量组P>0.05,差异无统计学意义,中药中、高剂量组P<0.01；地塞米松组EOS计数较低(P<0.01)。与阻断剂组相比,中药低、中、高剂量组EOS计数较高(P<0.01)；地塞米松组EOS计数也高但P>0.05,差异无统计学意义。与地塞米松组相比,中药低、中、高剂量组EOS计数均高,但中药高剂量组P>0.05,差异无统计学意义,中药低、中剂量组P<0.01。 EOS计数结果从高到低依次为模型对照组、中药低、中、高剂量组、地塞米松组、阻断剂组、空白对照组。2.HE染色：空白对照组未见炎性细胞浸润,且肺泡、支气管黏膜上皮结构完整清晰,支气管无痉挛；阻断剂组可见少量炎性细胞浸润,肺内结构尚完整清晰,未见支气管痉挛；余模型对照组、中药低、中、高剂量组和地塞米松组均可见肺组织炎性细胞浸润,支气管黏膜上皮细胞排列紊乱、成片脱落,肺泡间隔增厚,支气管痉挛等典型支气管哮喘病理表现,但病理损害轻重程度不同。对其进行组织损伤及炎症病理学评分示：在项目炎性细胞浸润方面,得分从高到低依次是模型对照组=中药低剂量组>中药中剂量组=中药高剂量组>地塞米松组>阻断剂组=空白对照组；在项目支气管上皮细胞脱落方面,得分从高到低依次是模型对照组>中药低剂量组=中药中剂量组>中药高剂量组=地塞米松组>阻断剂组=空白对照组；在项目肺泡间隔增厚方面,得分从高到低依次是模型对照组=中药低剂量组>中药中剂量组>中药高剂量组=地塞米松组>阻断剂组=空白对照；在项目支气管痉挛方面,得分从高到低依次是模型对照组=中药低剂量组>中药中剂量组=中药高剂量组>地塞米松组>阻断剂组=空白对照；总分得分从高到低依次是模型对照组>中药低剂量组>中药中剂量组>中药高剂量组>地塞米松组>阻断剂组>空白对照组。以上P值均<0.01。3.血清IgE：与空白对照组相比,各组血清IgE均显著升高(P<0.01),中药低、中、高剂量显示出量效关系。与模型对照组相比,阻断剂组血清IgE较低(P<0.01),中药低、中、高剂量组血清IgE也低,但中药低剂量组P>0.05,差异无统计学意义,中药中、高剂量组P<0.05；地塞米松组血清IgE较低(P<0.01)。与阻断剂组相比,中药低、中、高剂量组血清IgE较高(其中中药低剂量组P<0.05,中药中、高剂量组P<0.01)；地塞米松组血清IgE也高但P>0.05,差异无统计学意义。与地塞米松组相比,中药低、中、高剂量组血清IgE均高,但中药高剂量组P>0.05,差异无统计学意义,中药低剂量组P<0.05、中药中剂量组P<0.01。4. RealTime-PCR对p65mRNA表达量的分析结果显示,各组间mRNA表达量均无显著差异(P>0.05)对IκBα mRNA的表达量的分析结果显示,各组间mRNA表达量均无显著差异(P>0.05)。5. Western Blot:对p65核蛋白表达量分析显示,与空白对照组相比,阻断剂组含量升高但无统计学差异(P>0.05),其余组p65表达量均明显升高(P<0.05)。与模型对照组相比,正常对照组、阻断剂组、地塞米松组和中药高剂量组p65表达量明显减少P<0.05),中药中剂量组和中药低剂量组也有所下降,但无统计学差异(P>0.05)。与阻断剂组和与糖皮质激素组比较,各中药治疗组p65表达量明显增加(P<0.05),且呈现量效关系。对IκBα胞浆蛋白表达量分析显示,与空白对照组相比,阻断剂组表达量下降但不显著(P>0.05),其他各组均显著下降(P<0.05)；与模型组对照组相比,其他各组显著升高(P<0.05)；与地塞米松组相比,中药高,中,低剂量组IκBα蛋白量显著下降,且具有统计学差异(P<0.05)。与阻断剂组相比,中药高,中,低剂量组IκBα表达量减少,其中中药高剂量组IκBα表达量略有下降,但无统计学差异(P>0.05),中,低剂量组有差异。中药高,中,低剂量组表现出量效关系。结论：1.芪味理肺汤可有效治疗支气管哮喘,且高剂量效果最佳。2.在该实验条件下,芪味理肺汤对于哮喘的治疗效果不及地塞米松,但服用芪味理肺汤不会引起明显的副作用。3.芪味理肺汤可在翻译水平对细胞核中p65水平下调,对胞浆中IκBα水平上调。4.芪味理肺汤的抗炎效果与其在翻译水平对NF-κB信号通路的抑制有关。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-9
英文缩略语  9-10
第一部分 文献综述  10-25
  综述一 支气管哮喘研究现状  10-18
  综述二 哮喘与NF-κB信号通路  18-23
  综述三 芪味理肺汤治疗法则及方药介绍  23-25
前言  25-26
第二部分 实验研究  26-53
  第一章 实验路线设计及样品制备  26-30
    一. 技术路线  26-27
    二. 材料和方法  27-30
  第二章 芪味理肺汤的抗炎效果评价  30-42
    一. 材料和方法  30-32
    二. 结果  32-40
    三. 讨论  40-41
    四. 结论  41-42
  第三章 芪味理肺汤抑制NF-κB机制研究  42-53
    一. 材料和方法  42-47
    二. 结果  47-51
    三. 讨论  51-52
    四. 结论  52-53
    五. 总结  53
参考文献  53-64
致谢  64-65
个人简历  65

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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