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黄连多糖的提取方法、单糖组成及其抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

作　者: 唐策
导　师: 张艺
学　校: 成都中医药大学
专　业: 药物化学
关键词: 黄连多糖响应面优化法单糖组成 α-葡萄糖苷酶
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 26次
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内容摘要

黄连为毛茛科植物黄连Coptis. chinensis Franch.,三角叶黄连C. deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao和云连C. teeta Wall的干燥根茎,药材依次习称为“味连”、“雅连”、“云连”,具有清热燥湿、泻火解毒的功效。目前,关于黄连主要集中在生物碱化学与药理学等方面较多,对于黄连多糖的生物活性和组成分析的研究却鲜有报道。目的：开展黄连多糖的提取方法研究,建立黄连多糖单糖组分控制方法,并对黄连多糖与黄连生物碱体外抑制α-葡萄糖苷酶的活性进行比较,为黄连资源的综合利用及质量控制提供科学依据。方法：1.采用Box-Behnken设计-效应面法,研究黄连多糖回流提取过程中四个主要因素：提取温度、提取次数、提取时间和料液比,以及它们之间的交互作用,及其对三个响应值(多糖出膏率、多糖得率和糖醛酸得率)的影响。2采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化HPLC法,建立分析三个黄连品种(味连Coptis chinensis、雅连C. deltoidea和云连C. teeta)多糖的单糖组分分析方法。3.采用体外抑制α-葡萄糖苷酶活性方法,研究黄连多糖及生物碱组分体外抑制α-葡萄糖苷酶活性。结果：1.通过单因素实验确定影响黄连多糖提取方法主要因素的适宜水平,分别为：提取温度80-100℃,提取时间2-4h,提取次数1-3次,料液比1：10-1：20。进一步采用Box-Benhnken设计方案分别进行29次选择性组合实验,以出膏率、多糖得率、糖醛酸得率为响应面作响应值,·得到相应的数学模型,最终得到提取温度为100℃,提取时间为3.8h,提取次数为3次,料液比1：15.7为黄连多糖的最佳提取方法条件。2.建立了不同品种黄连药材中半乳糖醛酸等7种单糖成分的HPLC组成分析方法,其重复性、选择性良好,7种单糖的平均回收率为97.09-99.14%,三种黄连多糖的组成成分一致,味连多糖中甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖的摩尔比为0.20：1：0.08：6.35：3.63：1.89：3.20；雅在多糖为0.39：1：0.14：6.35：4.83：2.38：2.77；云连多糖为0.38：1：0.09：5.83：5.70：2.44：4.40。3.黄连多糖与其生物碱均具有较好抑制α-葡萄糖苷酶的活性,黄连多糖部位的[Cs0值为296.89μg·mL-1,黄连生物碱部位的IC50值为171.67μg·mL-1,而黄连其他部位则表现为很弱。发现二者不同的配比对α-葡萄糖苷酶抑制作用有很大的差别,黄连多糖与黄连生物碱3：1,其IC50值最低,揭示其抑制α-葡萄糖苷酶活性最强。结论：1.提取温度为100℃,提取时间为3.8h,提取次数为3次,料液比为1：15.7,构成黄连多糖的最佳提取方法条件。2.黄连多糖经水解成单糖,通过PMP衍生后,在250nm下具有很强的紫外吸收,该方法具有较好的重复性、稳定性。3.黄连多糖与黄连生物碱部位均具有较好抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用,二者配伍后抑制a-葡萄糖苷酶的活性优于单一部位。

全文目录

摘要  2-4
Abstract  4-8
英文缩写词对照表  8-9
引言  9-11
第一章 Box-Behnken设计-效应面法优化黄连多糖的提取方法研究  11-43
  1 仪器与试药  11
  2 实验方法  11-35
    2.1 黄连多糖的提取方法  11-12
    2.2 粗多糖出膏率的测定  12
    2.3 多糖含量的测定及多糖得率的计算  12-16
    2.4 糖醛酸含量的测定及糖醛酸得率的计算  16-20
    2.5 提取方法参数的选择  20-22
    2.6 黄连多糖方法参数的优化  22-35
  3 小结与讨论  35-43
第二章柱前衍生化-HPLC法测定黄连多糖的单糖组分  43-54
  1 仪器与试药  43-44
  2 实验方法  44-53
    2.1 黄连多糖的制备  44-45
    2.2 色谱条件  45
    2.3 溶液的配制  45
    2.4 衍生化步骤  45
    2.5 线性关系的考察  45-47
    2.6 方法学考察  47-51
    2.7 黄连多糖的单糖组分  51-53
  3 小结与讨论  53-54
第三章黄连多糖及生物碱组分体外抑制α-葡萄糖苷酶活性研究  54-67
  1 仪器与试药  54-55
  2 实验方法  55-65
    2.1 不同黄连化学部位的制备——黄连总多糖、总生物碱和其他部位  55
    2.2 溶液的配制  55-56
    2.3 标准曲线的制作  56-57
    2.4 检测方法  57
    2.5 α-葡萄糖苷酶活力的测定  57-58
    2.6 抑制率的计算  58
    2.7 黄连不同部位不同浓度对α-葡萄糖苷酶的抑制作用  58-65
  3 小结与讨论  65-67
第四章总结与讨论  67-70
  1 总结  67
  2 讨论  67-69
  3 创新性  69
  4 不足与展望  69-70
参考文献  70-73
综述  73-80
  参考文献  78-80
致谢  80-81
在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果  81-82

黄连多糖的提取方法、单糖组成及其抑制α-葡萄糖苷酶活性研究

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