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橘果皮不同生长期主要活性成分动态变化规律研究

作　者: 韦正
导　师: 刘友平
学　校: 成都中医药大学
专　业: 药物化学
关键词: 橘果皮不同生长期活性成分动态变化规律研究
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

橘皮为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培变种的果皮,因不同生长期采收而成为(陈皮和青皮)两味功效存在差异的中药,即成为两味“同源不同性、一体二用”的中药。在临床功效上：陈皮长于理气健脾；青皮长于疏肝破气。而两者在成分、药效等诸多方面存在共性,由于两者采摘时生长时间不同,所致的主要活性成分有差异,进而使两药在作用部位、作用强度等方面各有特性。即两者在主成分含量、比例上差异较大,导致其药效差异及在作用上亦各具特点。目前研究表明,植物的次生代谢产物大多具有生理活性,亦为主要活性成分,是植物药产生药效的重要药效物质基础。而这些主要活性成分的合成及积累受其自身遗传因素制约以及环境因子的影响,为了避免遗传因素及环境影响,故在研究中定同一植株、定产地来采集样品。而不同生长期橘果皮主要活性成分的组成、含量及相对比例未有系统深入研究；以及对定植株不同生长期采集的橘果皮化学成分动态变化比较研究亦未有系统深入报道。同时,对影响陈皮、青皮两药功效差异的关键因素未阐明,且同一植株不同生长期成分动态变化与药效相关尚未有研究。因此,研究两药不同生长期在组成分含量差异,将为阐释影响两药功效差异的物质基础提供理论依据。本研究以陈皮、青皮为研究对象,为了排除环境影响及自身遗传因素对次生代谢产物的合成及积累的影响,本文特地以定同一植株、定产地来研究橘皮药材,对橘皮(6月至次年2月,每半月采摘一次)进行了从植株挂果到果实成熟的次生代谢产物研究,以主要活性成分黄酮类、酚酸类、生物碱、挥发油等为指标,首次系统研究了同一植株橘皮整个生长期内主要活性化学成分动态变化规律,为陈皮、青皮的质量评价体系的完善提供实验依据,为进一步分析橘皮次生代谢产物积累变化规律与其功效的相关性奠定基础。研究内容及结果如下：1.橘皮不同采收期主要活性成分比较研究对橘皮不同生长期黄酮类成分、总酚酸、生物碱、挥发油的含量变化进行了对比分析,以期为研究橘皮次生代谢产物积累变化规律与其功效的相关性奠定基础,为阐释中药陈皮、青皮药材“一体二用”的科学内涵提供示范。1.1黄酮类成分橘皮药材中所含黄酮类成分主要以橙皮苷、芸香柚皮苷、川陈皮素、橘皮素等为主,该类成分有抗炎、抗病毒、抗癌、抗氧化及心血管保护等作用,本研究采用HPLC建立了双波长同时测定橘皮药材中4种黄酮苷的方法；同时采用紫外-可见分光光度计建立了测定橘皮药材中总黄酮含量的方法,共测定了45批药材。结果表明：橘皮中总黄酮的含量从7月份幼果期的16.55%递减至12月份成熟期的10.37%；芸香柚皮苷从幼果期的0.85%降至成熟期的0.17%；橙皮苷从幼果期的10.58%降至成熟期的5.25%；而川陈皮素和橘皮素的含量呈现先增加后降低的变化趋势。即青皮和陈皮的黄酮类成份含量有差异的,该结果为研究陈皮、青皮两药的差异提供理论依据。1.2总酚酸文献报道,酚酸类成分具有抗氧化、抗自由基、有抗癌、抗炎症和抗血小板凝聚等功能,以及能抑制低密度脂蛋白的氧化、预防心血管疾病的作用。本研究参考《中国药典》2010年版附录XB项下鞣质含量测定方法,共测定了45批药材,首次系统比较分析同一植株橘果皮不同生长期药材中总酚酸含量变化规律。结果表明：橘皮中总酚酸的含量从7月份幼果期的6.454%递减至12月份成熟期的3.801%,该研究结果为以橘皮中以总酚酸来研究陈皮、青皮两药的差异提供理论依据。1.3生物碱类成分橘皮中所含的辛弗林具有有收缩血管、升高血压、扩张气管和支气管等作用,本文采用HPLC建立了测定橘皮药材中辛弗林含量的方法,共测定了45批药材。结果表明：橘果皮从幼果期到成熟期,辛弗林的含量均呈现递减的变化趋势,辛弗林含量从0.95%降至0.39%。7月份幼果期采摘的橘皮中辛弗林的含量较在12月份成熟期之后采摘的橘果皮高。7-9月份为橘果实的果实膨大期,幼果期、果实膨大期的橘皮辛弗林的含量显著高于成熟期的橘皮,结果与课题组前期研究青皮辛弗林的含量高于陈皮一致。该方法简便、高效,可为陈皮、青皮药材、饮片及含有橘皮中成药的质量控制研究提供参考。1.4挥发油橘皮中挥发油为主成分之一,柠檬烯、松油醇、松油烯具有抗癌、抗菌活性。本研究采用HS-SPME/GC/MS建立了橘皮中挥发性成分含量测定方法,结果共鉴定出36个化合物,各批次含量按面积归一化法分别为88.26%,84.1%,92.25%,93.74%,91.41%,88.59%,88.79%,91.04%,96.53%,85.68%,81.93%,86.93%,85.49%。其中主要成分为柠檬烯、芳樟醇、e-萜品烯、α-法呢烯、百里香酚含量较高。以样品JM3为例,含量最高的化合物为柠檬烯,达31.70%,其次为芳樟醇达17.29%,以化学型来划分其属于柠檬烯/芳樟醇类。不同生长期的橘皮挥发油含有相同的物质成分,各成分在含量上有差异,r-萜品烯在橘皮生长期中有规律性的变化。该方法简便、高效,可为含挥发性成分的芳香辛味中药的成分研究提供理论依据。以上结果表明,从幼果期到成熟期,橘果皮中总黄酮、生物碱、总酚酸、橙皮苷、芸香柚皮苷、辛弗林的含量均呈现递减的变化趋势；川陈皮素、橘皮素的含量呈现先增加后降低。橘皮中的挥发油含有相同的物质成分,但各成分在含量上有一定差异,还需进一步研究分析。该研究结果为研究陈皮、青皮的药效差异提供了理论依据。2.橘叶及橘皮4种黄酮的初步比较研究橘叶、橘皮同源而不同部位入药,橘叶具有疏肝、消肿散结的作用。本研究采用HPLC建立了橘叶中4种黄酮苷含量测定方法,比较了橘叶、橘皮不同生长期4种黄酮动态变化规律,共测定了30批次药材。2.1橘叶不同生长期4种黄酮初步比较研究测定同植株橘叶不同生长期4种黄酮,结果发现,橘叶中的橙皮苷在8月份果实膨大期含量最高(4.283%)；同时橘叶所含的橙皮苷、芸香柚皮苷、川陈皮素、橘皮素4种成分从幼果期、膨大期及成熟期亦有规律变化,其含量先增加后降低。2.2橘叶与橘皮4种黄酮初步比较研究测定了同植株橘叶、橘皮不同生长期4种黄酮,结果发现7月份幼果期采集的橘叶SY1的4种成分均低于橘皮S1的含量；在12月份成熟期采集的橘叶SY7样品中橙皮苷的含量低于同一期采集的橘皮S7,而其他3种黄酮成分芸香柚皮苷、川陈皮素及橘皮素的含量未有显著差异。本研究为同源的橘叶、橘皮两药药效及功效差异的物质基础提供理论依据。3. HPLC指纹图谱比较研究3.1不同生长期橘皮HPLC指纹图谱比较研究目前,主要以橙皮苷含量作为陈皮药材的质量控制指标,而单一的橙皮苷含量不能全面反映陈皮的质量,HPLC指纹谱在体现化学成分类型、物种间的差异及质量控制方面可发挥重要作用。本文采用HPLC方法首次对同一植株橘果皮甲醇提取物的指纹图谱进行比较研究,运用国家药典委员会发布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”分析图谱。结果表明,橘果皮不同生长期指纹图谱差异较小,相似度均大于0.95,说明其所含主要化学成分种类相近。结合相对峰面积分析,发现8批橘皮各成分比例相差较大,辛弗林在幼果期的相对峰面积值大于果实成熟期的相对峰面积；川陈皮素和橘皮素的相对峰面积从幼果期到成熟期,其变化趋势为先增加后逐渐降低。这一结果与上述化学成分含量测定结果一致。3.2不同柑橘品种HPLC指纹图谱比较研究橘皮为芸香科柑橘属C. Blanco及其栽培变种的果皮,有红橘C. Hort. et Tanaka (大红袍品系)、茶枝柑C. chachiensis Hort.、四会柑C. suhoiensis Hort. ex Tanaka等,其中《中国药典》2010年版收载橘的变种主要有：福橘C. tangerina Hort、朱橘C. erythrosa Tanaka、温州蜜橘C. unshiu Marcoritch.、黄岩蜜橘C.subcompressa Tanaka。本文采集了10批不同品种柑橘皮样品,分别为红橘、椪柑、沙蜜橘、天草一号、蜜橘、蜜园30、瓯柑、茶枝柑、福橘及南丰蜜,其中红橘、茶枝柑、福橘为药典收载品种。本文采用HPLC方法对不同品种柑橘皮的甲醇提取物指纹图谱进行比较研究,运用国家药典委员会发布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)”分析图谱。直观分析图谱,椪柑、沙蜜橘、天草一号、蜜橘及瓯柑与红橘对照指纹的相对峰面积的比例有显著的差异。茶枝柑、福橘及南丰蜜橘与红橘对照谱图对比,发现相似度上很接近,但在各个成分间比例有差异。聚类分析,结果发现红橘、椪柑、沙蜜橘、茶枝柑、福橘、南丰蜜橘为一大类,天草一号、蜜园30、瓯柑为一类,蜜橘单独为一类。4.不同贮藏年限广陈皮中辛弗林及总黄酮含量比较研究广陈皮为陈皮中质量最优的药材,为阐释在贮藏养护过程在总黄酮类及生物碱的化学成分上的变化规律,以期为临床合理用药提供理论依据。本文以广陈皮为研究对象,采用HPLC建立了药材中辛弗林的含量测定方法,采用紫外-可见分光光度计建立了药材中总黄酮含量测定方法,测定了21批次药材。结果发现随贮藏时间的延长,广陈皮总黄酮类成分的含量有降低的趋势；辛弗林的含量从0.273%降至0.1097%,即随贮藏时间的增加有降低的趋势。

全文目录

中文摘要  2-7
Abstract  7-14
1 前言  14-26
  1.1 文献综述  14-24
    1.1.1 药用植物次生代谢产物的研究现状初探  14-15
    1.1.2 不同生长期中药有效物质的研究现状  15-16
    1.1.3 橘皮资源概述  16-17
    1.1.4 橘皮类药材研究现状  17-24
      1.1.4.1 化学成分  17-21
      1.1.4.2 药理作用  21-22
      1.1.4.3 质量控制现状  22-24
    1.1.5 小结  24
  1.2 立题依据  24-25
  1.3 研究工作内容  25-26
    1.3.1 橘皮主要活性成分动态变化规律研究  25
    1.3.2 不同药用部位4种黄酮成分的初步比较研究  25-26
    1.3.3 HPLC指纹图谱比较研究  26
    1.3.4 不同贮藏年限广陈皮中辛弗林及总黄酮含量比较研究  26
2 实验部分  26-75
  2.1 实验仪器与材料  26-28
    2.1.1 实验仪器  26
    2.1.2 材料及试剂  26-27
    2.1.3 药材  27-28
  2.2 橘果皮不同生长期主要活性成分比较研究  28-53
    2.2.1 不同生长期黄酮类成分动态变化研究  28-38
      2.2.1.1 总黄酮含量的测定  29-30
      2.2.1.2 4种黄酮苷含量测定  30-33
      2.2.1.3 结果与分析  33-38
      2.2.1.4 小结  38
    2.2.2 不同生长期酚酸类成分动态变化研究  38-41
      2.2.2.1 总酚酸的含量测定  39-40
      2.2.2.2 结果与分析  40
      2.2.2.3 小结  40-41
    2.2.3 不同生长期橘皮中辛弗林动态变化研究  41-47
      2.2.3.1 辛弗林的含量测定  41-43
      2.2.3.2 结果与分析  43-46
      2.2.3.3 小结  46-47
    2.2.4 不同生长期橘皮挥发性成分动态变化研究  47-53
      2.2.4.1 挥发油定性分析  48
      2.2.4.2 结果与分析  48-50
      2.2.4.3 讨论  50-52
      2.2.4.4 小结  52-53
  2.3 不同药用部位4种黄酮初步比较研究  53-58
    2.3.1 4种黄酮的含量测定  54-57
      2.3.1.1 样品含量的测定  56-57
    2.3.2 结果与分析  57
      2.3.2.1 橘叶不同生长期4种黄酮初步比较研究  57
      2.3.2.2 橘叶与橘皮4种黄酮初步比较研究  57
    2.3.3 小结  57-58
  2.4 HPLC指纹图谱比较研究  58-72
    2.4.1 指纹图谱的获取方法  58-63
    2.4.2 不同生长期橘皮HPLC的指纹图谱比较研究  63-67
      2.4.2.1 橘皮HPLC对照指纹图谱的建立  63-64
      2.4.2.2 相似度评价分析  64-67
      2.4.2.3 小结  67
    2.4.3 不同柑橘品种HPLC指纹图谱比较研究  67-72
      2.4.3.1 对照指纹图谱的建立  67
      2.4.3.2 相似度评价分析  67-71
      2.4.3.3 讨论  71
      2.4.3.4 小结  71-72
  2.5 不同贮藏年限广陈皮辛弗林及总黄酮含量变化研究  72-75
    2.5.1 不同贮藏年限辛弗林的含量测定  72-73
    2.5.2 不同贮藏年限总黄酮的含量测定  73
    2.5.3 结果分析  73-74
      2.5.3.1 不同贮藏年限辛弗林的含量比较  73-74
      2.5.3.2 不同贮藏年限总黄酮的含量比较  74
    2.5.4 讨论  74-75
    2.5.5 小结  75
3 结论  75-79
4 讨论  79-81
参考文献  81-85
致谢  85-86
附件  86-88

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