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基于色谱联用技术对茶叶成分的分离制备及其抗氧化活性的检测

作　者: 陈芳芳
导　师: 吴振；丘鹰昆
学　校: 厦门大学
专　业: 药物化学
关键词: MPLC×prep-HPLC CCC×prep-HPLC HPLC-FRAP抗氧化活性筛选法
分类号: R284.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

复杂成分的快速分离与活性检测是研究天然产物的难点问题,本文以茶叶水提物为研究对象,首次采用三种在线串联液相色谱技术实现了对茶叶复杂成分的在线分离制备及其抗氧化活性成分的筛选。首先,根据分子排阻色谱和反相色谱不同的分离机理,本研究采用Sephadex LH-20中压柱作为第一维柱,以C18制备色谱柱作为第二维柱,构建了具有正交性的全二维在线中压液相×制备型高效液相色谱的制备液相色谱系统(MPLC×prep-HPLC)。通过该系统一次性分离制备得到18个成分,结合核磁和质谱数据进行结构表征,鉴定了16个化合物,显示出很高的分离效率。然后,在一维柱后稀释-富集柱富集的切换接口的基础上,构建在线逆流色谱×制备型高效液相系统(CCC×prep-HPLC)。CCC作为第一维分离柱,C18制备柱作为第二维分离柱,并采用双水相溶剂体系-异丙醇/16%氯化钠溶液(1：1.2,v/v)为CCC的溶剂体系。在最佳的分离条件下,通过采用上述的CCC×prep-HPLC系统,从茶叶水提物中一次性分离制备得到了18个成分,其中鉴定了10个化合物,表明此系统可以快速有效地用于茶叶复杂成分的分离和制备。最后,采用快速高效的HPLC-FRAP在线抗氧化活性筛选方法对六种茶叶水提物的抗氧化活性成分进行检测。在二维分离制制备得到的已知化合物的基础上,对铁观音茶叶的抗氧化活性成分进行鉴定,确定了8个抗氧化活性成分,其中儿茶素(EC)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为其主要的抗氧化活性成分。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
缩略语  7-14
第一章前言  14-30
  1.1 引言  14
  1.2 茶叶概述  14-19
    1.2.1 茶叶的分类  14-15
    1.2.2 茶叶主要成分  15-18
    1.2.3 茶叶的抗氧化性  18-19
  1.3 二维液相色谱技术  19-23
    1.3.1 二维液相色谱的原理  19-20
    1.3.2 二维液相色谱的分类  20
    1.3.3 二维液相的偶联方式  20-22
    1.3.4 二维液相色谱在中药领域中的应用  22-23
  1.4 逆流色谱技术  23-26
    1.4.1 逆流色谱分离原理和特点  23
    1.4.2 逆流色谱溶剂体系的选择  23-24
    1.4.3 亲水有机溶剂/无机盐的双水相溶剂体系  24
    1.4.4 逆流色谱联用技术及应用  24-26
  1.5 抗氧化检测技术  26-29
    1.5.1 抗氧化活性评价方法  26-28
    1.5.2 在线HPLC法筛选抗氧化剂  28-29
  1.6 主要研究内容  29-30
第二章全二维液相制备色谱分离制备茶叶的成分  30-40
  2.1 引言  30
  2.2 色谱耗材、试剂及仪器  30-31
    2.2.1 实验耗材与试剂  30-31
    2.2.2 实验仪器  31
  2.3 茶叶水提物的准备  31
  2.4 茶叶水提物直接进样制备和离线二维分析  31-34
    2.4.1 茶叶水提物的HPLC分析  31-32
    2.4.2 茶叶水提物直接进样制备  32-33
    2.4.3 茶叶水提物的二维离线分析  33-34
  2.5 Sephadex LH-2×C18二维制备液相系统的构建及应用  34-39
    2.5.1 全二维制备液相的构建  35-36
    2.5.2 全二维制备工作参数设定  36
    2.5.3 全二维制备液相色谱条件  36
    2.5.4 茶叶水提物Sephadex LH20×RP分离  36-39
  2.6 本章小结  39-40
第三章双水相逆流液相色谱串联制备型液相技术在线分离制备茶叶中多酚类成分  40-49
  3.1 引言  40
  3.2 色谱耗材及试剂  40-41
  3.3 仪器系统的构建  41-42
  3.4 CCC×prep-HPLC对茶叶水提取物的分离  42-48
    3.4.1 CCC分离条件的选择  42-45
    3.4.2 HSCCC对茶叶水提取物的分离  45
    3.4.3 二维工作参数的设定  45-46
    3.4.4 二维分离过程及结果  46-48
  3.5 本章小结  48-49
第四章 HPLC-FRAP法在线检测茶叶中抗氧化活性成分  49-54
  4.1 引言  49
  4.2 实验试剂及耗材、仪器  49-50
    4.2.1 实验试剂及耗材  49
    4.2.2 茶叶来源  49
    4.2.3 仪器  49-50
  4.3 仪器系统的搭建  50
  4.4 在线检测茶叶的抗氧化活性成分  50-52
    4.4.1 茶样提取液的制备  50-51
    4.4.2 FRAP工作液的配制  51
    4.4.3 色谱条件  51
    4.4.4 在线HPLC-FRAP法  51-52
  4.5 本章小结与讨论  52-54
第五章化合物的结构解析  54-61
第六章总结  61-62
参考文献  62-69
硕士期间发表的文章  69-70
致谢  70-71
附录  71-87

基于色谱联用技术对茶叶成分的分离制备及其抗氧化活性的检测

内容摘要

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