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藏药三果汤散干预高原红细增多症的代谢组学初步研究

作　者: 张海伟
导　师: 张艺
学　校: 成都中医药大学
专　业: 药物化学
关键词: 藏药三果汤散高原红细胞增多症代谢组学机制
分类号: R29
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

高原红细胞增多症(HAPC)是我国青藏高原地区的常见病与多发病,严重威胁着生活和工作在高原地区人们的身体健康。目前现代医学对于HAPC的治疗尚无有效方法,一般只能采用间断吸氧改善缺氧状态或采用高压氧舱缓解,重症患者需要及时移居海拔低处(平原)治疗。藏医学对于多血症(相当HAPC)的治疗具有独特的优势,藏医放血疗法将特定穴位病血从体内引出,而达到治疗HAPC目的。藏药三果汤散为藏医放血疗法治疗HAPC之前必服的分离汤,用于使病血液与正常血液分离,目前藏药三果汤散干预藏医放血疗法治疗HAPC的机制未见文献报道。目的采用代谢组学的方法,研究藏药三果汤散对HAPC大鼠模型及藏医多血症患者的干预作用,以阐释三果汤散干预藏医放血疗法治疗HAPC的作用机制。方法1、在模拟海拔5000m高原环境的低压舱中,使大鼠处于低氧环境40天(22h/d),建立HAPC大鼠模型,观察三果汤散干预HAPC大鼠的红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)等血常规指标。2、以HAPC大鼠模型为研究对象,采用ECF衍生血浆的GC-MS测定方法,结合主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)等化学计量学方法,确定血浆代谢图谱的内源性代谢物,并探索三果汤散干预HAPC模型大鼠的相关差异性代谢物。3、在西藏自治区藏医院采集HAPC患者血样15例(所有患者的血红蛋白浓度均达到HAPC的纳入标准：男性HGB≥210g/L,女性HGB≥190g/L),并对其进行血常规、血液流变学、血气分析检查。4、以HAPC患者为研究对象,采用ECF衍生血浆的GC-MS的方法,结合PCA、PLS-DA,分析HAPC患者血浆代谢图谱的内源性代谢物,并探讨藏医治疗放血前后的相关差异性代谢物。结果1、藏药三果汤散对于HAPC大鼠模型有一定的预防作用,血液的各项指标均有差异,对大鼠的血浆进行GC-MS代谢组学分析结果表明,通过PCA得分图,HAPC模型和三果汤散高剂量、三果汤散低剂量组、诺迪康胶囊组之间可以显著区分,经过对三果汤散干预HAPC大鼠内源性标志物鉴定,结果表明为9-己基-十七烷,甘氨酸,N-甲基-N-甲氧基羰基-乙酯、2,4-二叔丁基苯酚为主要生物标志物。2、对15例JHAPC患者临床实验的结果表明,HAPC患者血液中各项生化指标经治疗前后均有差异。经过藏医放血疗法治疗后,患者的头痛、紫绀有所缓解,血红蛋白浓度降低。采用PCA、PLS-DA统计方法处理结果表明,藏医放血疗法治疗HAPC患者前后的血浆PCA得分图均有分离趋势,其体内的内源性物质分别为2-乙基乙醇、1-哌啶羧酸乙酯、2-氯-辛烷、乳糖、油酸、Glycine, N,N’-1,2-ethanediylbis [N-(2-ethoxy-2-oxoethyl)-, diethyl ester、2,2’-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)、邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯、1-octylthio-1-deoxy-Galactopyranoside、Cholesta-3,5-diene。结论对HAPC大鼠和HAPC患者血液的各项指标检验结果表明,三果汤散以及藏医放血疗法对HAPC有一定的改善作用。采用代谢组学方法,揭示了三果汤散干预HAPC大鼠模型的内源性物质为甘氨酸，N-甲基-N-甲氧基羰基-乙酯等,三果汤散干预藏医放血疗法治疗HAPC患者的内源性物质为1-哌啶羧酸乙酯等。

全文目录

摘要  2-4
Abstract  4-9
中英文缩写词对照表  9-10
引言  10-14
  一、高原病的研究现状  10
  二、藏药三果汤散  10-11
  三、藏医多血症及放血疗法  11-12
  四、研究思路  12-14
第一章藏药三果汤散干预HAPC模型大鼠的药效学试验研究  14-20
  1.1 实验材料  14-15
    1.1.1 动物模型  14
    1.1.2 主要仪器及试剂  14-15
    1.1.3 统计方法  15
  1.2 实验方法  15-18
    1.2.1 受试药物及给药剂量  15-16
    1.2.2 高原红细胞增多症大鼠模型的建立  16
    1.2.3 指标检测  16-18
  1.3 小结与讨论  18-20
第二章藏药三果汤散干预HAPC模型大鼠的代谢组学研究  20-35
  2.1 实验动物造模  20
  2.2 实验材料与仪器  20
  2.3 动物血浆代谢组学的实验方法  20-31
    2.3.1 血浆的采集  21
    2.3.2 大鼠血浆代谢组学研究  21-25
    2.3.3 方法学考察  25-31
  2.4 三果汤散对大鼠血浆代谢谱型的影响  31-33
    2.4.1 数据提取与鉴别  31
    2.4.2 数据统计化学模式识别：PCA分析  31-33
    2.4.3 潜在生物标志物的确定  33
  2.5 总结与讨论  33-35
第三章藏药三果汤散干预藏医放血疗法治疗HAPC患者的代谢组学研究  35-56
  3.1 材料与仪器  35
  3.2 HAPC患者血浆样本采集  35-36
    3.2.1 三果汤散样品服用方法  35-36
    3.2.2 血浆样本的来源、采集  36
  3.3 血常规参数指标检测  36-37
  3.4 HAPC患者血浆代谢组学研究  37-49
    3.4.1 血浆前处理  37
    3.4.2 内标溶液的配置  37
    3.4.3 进样前样品衍生处理  37-38
    3.4.4 GC-MS分析及条件设定  38-40
    3.4.5 进样量的考察  40-41
    3.4.6 样品最终条件  41-42
    3.4.7 方法学考察  42-49
  3.5 三果汤散干预藏医放血疗法治疗HAPC患者的代谢图谱研究  49-54
    3.5.1 色谱数据的提取与前处理  49-50
    3.5.2 数据统计化学模式识别：PCA分析  50-51
    3.5.3 数据统计化学模式识别：PLS-DA分析  51-53
    3.5.4 潜在生物标志物的确定  53-54
  3.6 总结与讨论  54-56
第四章结果与讨论  56-59
  4.1 结果  56-57
  4.2 讨论  57-58
  4.3 创新点与不足  58-59
参考文献  59-62
综述  62-69
  参考文献  67-69
附图  69-73
致谢  73-74
在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果  74-75

藏药三果汤散干预高原红细增多症的代谢组学初步研究

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