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不同温度下松浦镜鲤幼鱼蛋白质需求量的研究

作　者: 黄金凤
导　师: 徐奇友
学　校: 上海海洋大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 松浦镜鲤温度蛋白质水平生长性能非特异性免疫血清生化消化酶基因表达
分类号: S965.116
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

试验研究了松浦镜鲤幼鱼(10.11±1.07)在3种生长温度(18℃、23℃、28℃)下，饲喂5种蛋白质水平饲料(30%、32%、34%、36%、38%)的生长性能、非特异性免疫、血清生化、消化酶活性和IGF-Ⅰ、Hsp70及Wap65基因表达差异。试验随机分成15组，每组3个重复，每个重复30尾鱼。每天定时投喂3次，每次投喂以饱食无残饵为准。实验为期60d，饥饿24h后测定体重，统计饲料重。采样，测肝脏重、内脏重，计算相关的生长指标；采血用于血清生化指标测定；取肠道用于消化酶活性测定；剪取脑和肝脏组织用于IGF-I、Hsp70及Wap65基因表达的研究。结果显示，同一蛋白质条件下，鱼体的增重率(WGR)和特定生长率(SGR)随着水温的升高而显著增加(P<0.05)，且23℃幼鱼的蛋白质效率(PER)均值高于其它温度组；18℃下，饲喂5种蛋白组的幼鱼的肝指数(HIS)和脏指数(VI)值均大于23℃和28℃；血清补体3(C3)、补体4(C4)、免疫球蛋白M(IgM)，肝脏过氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)以及溶菌酶(LSZ)活性随着温度的升高而显著增加(P<0.05)；随温度的升高，血清甘油三酯(TG)、血清尿素氮(BUN)、酐(CREA)、血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)和血清谷草转氨酶(AST)含量显著下降(P>0.05)，血清碱性磷酸酶(ALP)含量显著上升(P<0.05)。23℃下血清葡糖糖(GLU)、r-谷氨酰转肽酶(GGT)含量显著高于其他两个温度组(P<0.05)。蛋白酶和淀粉酶活性随温度升高而显著升高(P<0.05)，而脂肪酶活性则随温度的升高而显著下降(P<0.05)；实时定量PCR研究结果显示，胰岛素样生长因子-I(IGF-I)、温暖温度适应蛋白(Wap65)基因在幼鱼的脑和肝脏组织的表达水平均随着温度的升高而显著提高(P<0.05)，而热休克蛋白(Hsp70）基因则相反，18℃表达量最大，23℃表达量最低。在3种生长温度(18℃、23℃、28℃)条件下，幼鱼的WGR和SGR随饲料蛋白水平的升高先增大后降低，并分别在32%、38%和36%蛋白水平达到最大值；血清C3、C4、IgM，肝脏SOD、MDA以及LSZ活性随着饲料蛋白质水平的升高先显著增加(P<0.05)，后有所降低；18℃条件下，TP和TG含量随饲料蛋白质水平升高而升高，AST含量则相反；各个蛋白组间血清总胆固醇(CHOL)浓度差异不显著(P>0.05)，BUN、CREA、GLU、ALB、ALT和ALP含量分别随饲料蛋白质水平的升高而先升高后降低；蛋白水平对蛋白酶和前肠淀粉酶影响显著(P<0.05)；随饲料蛋白质水平升高，肠道蛋白酶活性显著升高(P<0.05)，肠道淀粉酶和脂肪酶活性有所升高但差异不显著(P>0.05)；饲喂38%蛋白组的幼鱼的IGF-I基因在两种组织的表达量显著高于30%蛋白组(P<0.05)，而其它饲喂组与之差异不显著(P>0.05)；Wap65基因表达随饲料蛋白质水平升高显著升高，达到一定蛋白质水平后各个蛋白质组间差异不显著(P>0.05)，而Hsp70基因表达随饲料蛋白质水平升高先显著降低达到一定蛋白质水平后差异不显著(P>0.05)。结论：1.根据SGR及FE，镜鲤幼鱼最佳蛋白质水平18℃下为34.32%～34.78%，23℃下为35.44%～35.51%，28℃下为36.23%～37.12%。2.适宜的蛋白质水平可提高镜鲤非特异性免疫力，根据血清IgM以及肝脏LSZ活性，镜鲤幼鱼最佳蛋白质水平18℃下为34.81%～35.45%，23℃下为35.23%～36.49%，28℃下为36.02%～36.43%。3.23℃比18℃，28℃更有利于镜鲤的营养代谢，根据血清生化指标，18℃，23℃和28℃下，松浦镜鲤幼鱼饲料最适蛋白质的水平分别为32%，34%和34%。4.适宜的蛋白质水平可提高镜鲤幼鱼IGF-I及Wap65基因表达量，促进幼鱼生长。根据IGF-I、Hsp70及Wap65基因表达，镜鲤幼鱼最佳蛋白质水平18℃下为32%，23℃下为36%，28℃下为36%。综上所述，镜鲤幼鱼最佳蛋白质需要量推荐水平分别为：18℃：32%～35.45%，23℃：34%～36.49%，28℃下为36%～37.12%

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-11
引言  11-12
第一章文献综述  12-19
  1 温度对鱼类的影响  12-15
    1.1 温度对鱼类代谢的影响  12
    1.2 温度对消化酶活性的影响  12-13
    1.3 温度对生长的影响  13-14
      1.3.1 温度对蛋白质合成的影响  13
      1.3.2 温度对 IGF-I 的影响  13-14
    1.4 温度对基因表达的影响  14-15
      1.4.1 温度影响 Wap65 蛋白的表达  14
      1.4.2 温度影响热应激蛋白（Hsps）的表达  14-15
  2. 蛋白质水平对鱼类的需要  15-18
    2.1 蛋白质水平对消化酶活性的影响  15-16
    2.2 蛋白质水平对鱼类内分泌激素的调控  16-17
    2.3 蛋白质水平影响蛋白质合成能力  17-18
  3 温度与饲料蛋白质水平对鱼类生长和代谢的交互作用  18-19
第二章温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤幼鱼生长性能和非特异性免疫的影响  19-33
  2.1 材料与方法  19-22
    2.1.1 试验设计及日粮组成  19-21
    2.1.2 试验用鱼与饲养管理  21
    2.1.3 样品采集及分析  21
    2.1.4 测定指标及方法  21-22
      2.1.4.1 生长指标测定  21-22
      2.1.4.2 免疫指标测定  22
    2.1.5 数据分析和统计  22
  2.2 结果  22-30
    2.2.1 温度和饲料蛋白质水平对镜鲤幼鱼生长性能的影响  22-25
    2.2.2 温度和饲料蛋白质水平对镜鲤幼鱼血清 C3、C4 及 IgM 的影响  25-26
    2.2.3 温度和饲料蛋白质水平对镜鲤幼鱼肝脏 SOD、LSZ 及 MDA 活性的影响  26-27
    2.2.4 根据 SGR 及 FE 确定松浦镜鲤幼鱼最佳蛋白质需求量  27-29
    2.2.5 根据血清 IgM 及肝脏 LSZ 确定松浦镜鲤幼鱼最佳蛋白质需求量  29-30
  2.3 讨论  30-33
    2.3.1 温度与饲料蛋白质水平对松浦镜鲤鱼生长性能的影响  30-31
    2.3.2 温度与饲料蛋白质水平对松浦镜鲤幼鱼血清 C3、C4 及 IgM 的影响  31-32
    2.3.3 温度和饲料蛋白质水平对镜鲤幼鱼肝脏 SOD、LSZ 及 MDA 活性的影响  32-33
第三章温度和饲料蛋白质水平对镜鲤幼鱼血清生化的影响  33-41
  3.1 材料与方法  33-34
    3.1.1 试验饲料  33-34
    3.1.2 试验设计及饲养  34
    3.1.3 血清制备及生化指标测定  34
    3.1.4 数据处理  34
  3.2 结果  34-38
    3.2.1 温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤血清脂代谢和糖代谢指标影响  34-36
    3.2.2 温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤血清代谢指标影响  36-38
  3.3 讨论  38-41
    3.3.1 温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤血清糖代谢指标影响  38-39
    3.3.2 温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤血清脂代谢指标影响  39
    3.3.3 温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤氮代谢指标影响  39-41
第四章温度和饲料蛋白质水平对镜鲤幼鱼消化酶活性的影响  41-50
  4.1 材料与方法  42-43
    4.1.1 试验设计与饲料配方  42
    4.1.2 试验用鱼与饲养管理  42
    4.1.3 样品处理  42
    4.1.4 酶活力测定  42-43
    4.1.5 数据统计与分析  43
  4.2 结果  43-47
    4.2.1 温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤蛋白酶活力的影响  43-45
    4.2.2 温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤淀粉酶活力的影响  45-46
    4.2.3 温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤脂肪酶活力的影响  46-47
  4.3 讨论  47-50
    4.3.1 饲料蛋白质水平对松浦镜鲤幼鱼蛋白酶、淀粉酶及脂肪酶活力影响  47-48
    4.3.2 温度对松浦镜鲤幼鱼蛋白酶、淀粉酶及脂肪酶活力的影响  48
    4.3.3 松浦镜鲤幼鱼肠道不同部位蛋白酶、淀粉酶及脂肪酶活力  48-50
第五章温度和饲料蛋白质水平对镜鲤幼鱼 IGF-I、Hsp70 及 Wap65 mRNA 表达的影响  50-61
  5.1 材料与方法  50-53
    5.1.1 试验材料  50
    5.1.2 试验方法  50-53
      5.1.2.1 RNA 提取及 cDNA 模板的制备  51-52
      5.1.2.2 引物设计与筛选  52-53
      5.1.2.3 Real-Time RNA 反应  53
      5.1.2.4 数据统计方法  53
  5.2 结果与分析  53-58
    5.2.1 RNA 提取质量及单链 cDNA 合成结果  53
    5.2.2 温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤 IGF-I mRNA 表达影响  53-55
    5.2.3 温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤 Hsp70 mRNA 表达影响  55-57
    5.2.4 温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤 Wap65 mRNA 表达影响  57-58
  5.3 讨论  58-61
    5.3.1 温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤 IGF-I mRNA 表达影响  58-59
    5.3.2 温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤 Hsp70 mRNA 表达影响  59
    5.3.3 温度和饲料蛋白质水平对松浦镜鲤 Wap65 mRNA 表达影响  59-61
结论  61-62
参考文献  62-75
附录  75-76
致谢  76

不同温度下松浦镜鲤幼鱼蛋白质需求量的研究

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