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饲喂水平及外源瘦素抗体干预对小鼠初情期启动及相关激素内分泌的影响

作　者: 夏敏
导　师: 田科雄
学　校: 湖南农业大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: FSH LH 瘦素瘦素抗体初情期小鼠卵巢
分类号: S865.13
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

本试验主要为了探索leptin在小鼠性成熟过程中的作用与地位,通过酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)等相关检测技术,探索leptin与小鼠性成熟之间的联系机理。整个试验由两部分组成,通过设计不同营养水平以及使用外源性leptin抗体干预展开试验。第一部分限喂试验选取21日龄雌性昆明小鼠120只,随机分组,设自由采食组以及自由采食量的90%、80%、70%四个处理组,研究不同饲喂水平下小鼠初情期的启动,血清leptin水平与相关激素分泌的相关性以及卵巢leptin、Fshr和LhrmRNA的表达情况。小鼠用眼球摘除法采血后处死,血清样品-20℃保存,卵巢组织样品液氮速冻后快速送至-80℃超低温冰箱保存。研究结果表明：饲喂自由采食量80%或70%的小鼠血清leptin的水平较自由采食组有极显著(P<0.01)的降低,血清LH的含量变化差异不显著(P>0.05),FSH、TC以及TG含量的变化与leptin保持一致；而卵巢leptin、Fshr mRNA的相对表达量有极显著(P<0.01)的升高,与血清leptin含量变化相反；发情体重极显著(P<0.01)的减轻,发情日龄有所延长(P>0.05)。饲喂自由采食量90%的小鼠在发情体重和血清指标较自由采食小鼠略有降低,但差异不显著(P>0.05),卵巢相关基因的相对表达量除Fshr极显著(P<0.01)的升高外,leptin和Lhr mRNA表达量差异不显著(P>0.05),发情日龄有所提前(P>0.05)。第二部分抗体注射试验选取21日龄雌性昆明小鼠120只,随机分组,设生理盐水组、高剂量组、中剂量组以及低剂量组四个处理组,研究通过外源性leptin抗体干预后,小鼠的初情期启动、血清leptin水平与相关激素分泌的相关性以及卵巢leptin、Fshr和Lhr mRNA的表达情况,并与第一部分试验结果相结合,分析leptin在对小鼠初情期启动及相关激素内分泌调控过程中的作用机制。试验结果显示：leptin抗体处理小鼠与生理盐水对照相比较,血清leptin含量有降低的情况发生,但差异不显著(P>0.05)。发情体重有极显著的(P<0.01)增加,发情日龄无显著差异(P>0.05),小鼠卵巢leptin mRNA相对表达量均无显著性差异(P>0.05),但亦有升高,同血清FSH、LH以及TC、TG的含量一样受到leptin含量变化的调控影响。结合以上结果可以看出,饲粮营养水平的下降以及外源性leptin抗体的干预会导致小鼠体内leptin含量的降低,进而引起小鼠体内FSH、LH以及TC、TG的含量下降,卵巢leptin、Fshr和Lhr基因的表达量升高,并由此导致小鼠初情期的延后。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-11
第一章前言  11-23
  1 文献综述  11-21
    1.1 leptin及其受体  12-13
    1.2 leptin的作用机理  13-14
    1.3 leptin的主要生理功能  14-16
      1.3.1 leptin对能量代谢的调控作用  14
      1.3.2 leptin对采食量的短期调控作用  14-15
      1.3.3 leptin对动物体重的影响  15
      1.3.4 leptin对动物体内生长激素的调节  15-16
    1.4 leptin与动物的生殖机能  16-21
      1.4.1 leptin对动物初情期启动的调节  16-17
      1.4.2 leptin通过下丘脑-垂体-性腺轴对生殖活动的调节  17-18
      1.4.3 leptin与KiSS-1/GPR54系统  18-19
      1.4.4 leptin对胎盘及子宫的作用  19-21
  2 研究的目的意义与主要内容  21-23
    2.1 研究目的  21
    2.2 研究意义  21-22
    2.3 研究的主要内容  22-23
第二章不同饲喂水平对小鼠初情期启动及相关激素的影响  23-37
  1 材料与方法  23-31
    1.1 试验动物  23
    1.2 主要试剂和仪器  23-24
      1.2.1 试验试剂及配制  23
      1.2.2 试验仪器  23-24
    1.3 试验设计  24-25
    1.4 饲养管理与样品采集  25
      1.4.1 饲养管理  25
      1.4.2 样品采集  25
    1.5 试验指标测定与方法  25-31
      1.5.1 常规指标  25-26
      1.5.2 血脂检测  26
      1.5.3 血清leptin、FSH、LH的测定  26
      1.5.4 卵巢leptin、Fshr、Lhr的mRNA表达检测  26-31
    1.6 数据统计分析  31
  2 结果与分析  31-36
    2.1 不同饲喂水平小鼠体重与发情日龄的比较分析  31-32
    2.2 不同饲喂水平对小鼠血清leptin、FSH、LH含量的影响  32-33
    2.3 不同饲喂水平对小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量的影响  33-34
    2.4 不同饲喂水平对小鼠卵巢leptin、Fshr、Lhr的mRNA表达的影响  34-36
  3 小结  36-37
第三章腹腔注射leptin抗体对小鼠初情期启动及相关激素的影响  37-43
  1 材料和方法  37-38
    1.1 主要试剂和仪器  37
    1.2 试验设计  37
    1.3 饲养管理与样品采集  37
    1.4 试验指标测定与方法  37-38
  2 结果与分析  38-42
    2.1 leptin抗体处理小鼠体重与发情日龄的比较分析  38-39
    2.2 leptin抗体处理对小鼠血清leptin、FSH、LH含量的影响  39-40
    2.3 leptin抗体处理对小鼠血清TC、TG含量的影响  40
    2.4 leptin抗体处理对小鼠卵巢leptin、Fshr、Lhr的mRNA表达的影响  40-42
  3 小结  42-43
第四章讨论  43-50
  1 小鼠血清leptin水平对其初情期启动的影响  43-48
    1.1 小鼠血清leptin水平与其发情体重及初情日龄的关系  43-44
    1.2 小鼠血清leptin水平对其血清FSH及LH的影响  44-47
    1.3 小鼠血清leptin水平与其卵巢leptin、Fshr、Lhr mRNA表达的联系  47-48
  2 小鼠血清leptin水平对其血清TC及TG的影响  48-50
第五章结论与建议  50-51
  1 结论  50
  2 有待研究的问题  50-51
参考文献  51-59
附录  59-62
致谢  62-63
作者简介  63

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