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维生素A缺乏致盲肉牛眼底变化及相关蛋白分布规律的研究

作　者: 王朝阳
导　师: 邓立新
学　校: 河南农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 肉牛维生素A 眼底 IRBP 黑视蛋白
分类号: S858.23
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

为研究维生素A缺乏致盲肉牛的眼底变化及相关蛋白分布规律，本试验通过对维生素A缺乏肉牛流行病学、行为学、血液学的研究，以及运用眼底照相技术观察并记录眼底变化规律；并对牛眼球固定方法进行探索和运用免疫组织化学的方法研究相关蛋白的分布规律。得出以下结果：疑似维生素A缺乏牛体温升高，食欲下降，视物不清，步态改变，站立不稳。眼睛检查发现疑似维生素A缺乏牛的瞳孔膨胀为圆形；发病率为46%。疑似维生素A缺乏牛和正常牛通过障碍通道的时间相比，疑似维生素A缺乏牛用时时间长；正常牛与疑似维生素A缺乏牛通过障碍通道时碰撞障碍物次数上对比，疑似维生素A缺乏牛碰撞次数多于正常牛；随着重复次数的增加，疑似维生素A缺乏牛和正常牛通过时间均减少并逐渐趋于稳定。血清和饲料中维生素A含量远远低于正常标准含量；维生素A缺乏牛血清生化指标检测结果显示除AST稍有升高外，其余检查项目均在正常值范围之内；维生素A缺乏牛血常规指标检测结果显示全血中MCV含量低于正常范围。综合相关检测指标确诊为维生素A缺乏症。正常牛视盘表面平坦，边缘清晰可见，形态大小基本正常；视网膜动脉血管分支、色泽正常，血管无迂曲；视网膜无水肿、出血、渗出、色素紊乱等异常表现，绿毡和黑毡无异常。维生素A缺乏牛绿毡部出现大量灰色斑点样损伤和小片的不规则陈旧性病灶，部分区域有色素脱落及色素沉着；黑毡部的部分区域有斑块样色素脱落；静脉血管有轻微迂曲现象，视网膜血管比正常牛明显减少。其他未见明显异常。将常规切片制作方法设为对照组，创新的切片制作方法设为试验组。对照组标本固定后肉眼可见视网膜与脉络膜明显脱离；切片显示小梁网连续性受到破坏，视网膜各层组织细胞严重收缩，视网膜与脉络膜严重脱离，脉络膜与巩膜分离且视网膜组织出现缺损、断裂的现象。试验组标本固定后肉眼可见视网膜与脉络膜紧密相连，仅有小部分视网膜出现脱离的现象；切片显示小梁网连续性未被破坏，视网膜无脱离，各层组织细胞无收缩现象。维生素A缺乏牛的脉络膜及视网膜各层厚度均小于正常牛，且差异极显著。与正常牛相比，视锥视杆层和外丛状层均变薄甚至消失；内核层与外核层相互重叠；虹膜血管、小梁网处血管及视网膜血管较正常牛数量减少，且虹膜血管直径明显变小。角膜无明显差异。正常牛眼球标本各组织IRBP的表达结果显示：内核层、外丛状层、外核层、外界膜、视锥视杆层内节、视锥视杆层外节、视网膜色素上皮层有棕黄色阳性染色区域；脉络膜、巩膜、虹膜、角膜、神经节细胞层、神经纤维层、内丛状层未见有棕黄色阳性染色区域；脉络膜和虹膜血管内有棕黄色阳性染色区域。正常牛眼球标本各组织黑视蛋白的表达结果显示：神经节细胞层和神经纤维层有棕黄色阳性染色区域；脉络膜、巩膜、虹膜、角膜、内丛状层、内核层、外丛状层、外核层、外界膜、视锥视杆层内节、视锥视杆层外节、视网膜色素上皮层未见有棕黄色阳性染色区域；脉络膜和虹膜血管未见棕黄色阳性染色区域。正常牛眼组织中IRBP和黑视蛋白的平均灰度值低于维生素A缺乏牛的平均灰度值，且差异极显著。平均灰度值越大，表达量越低。本试验结果表明正常牛眼组织IRBP和黑视蛋白的表达量高于维生素A缺乏牛的表达量，且差异极显著。结论：建立了牛眼球标本石蜡切片方法和正常牛IRBP和黑视蛋白的分布；维生素A缺乏可引起牛眼底及眼组织发生病变且IRBP和黑视蛋白的表达量减少。

全文目录

致谢  4-8
摘要  8-10
缩略语表  10-11
文献综述  11-21
  1 维生素 A 视觉循环及光感受器受体类视黄醇结合蛋白研究进展  11-21
    1.1 维生素 A 视觉循环吸收与代谢  11-13
    1.2 IRBP 研究进展  13-21
      1.2.1 组织特异性表达  13-14
      1.2.2 IRBP 在类维甲酸视觉循环中的活性  14-15
      1.2.3 视紫红质再生  15-16
      1.2.4 视网膜脱落后视紫红质再生  16-17
      1.2.5 IRBP 演变和生理功能  17-21
引言  21-22
试验一随州某地区肉牛维生素 A 缺乏流行病学、行为学及血液学研究  22-29
  1.1 材料与方法  22-24
    1.1.1 试验动物  22
    1.1.2 主要仪器设备  22
    1.1.3 主要试剂  22
    1.1.4 样品采集及处理  22-23
    1.1.5 试验方法  23-24
    1.1.6 数据处理  24
  1.2 结果  24-26
    1.2.1 发病率和临诊检查结果  24
    1.2.2 血液学检查结果  24-25
    1.2.3 行为学试验结果  25-26
  1.3 讨论  26-27
    1.3.1 维生素 A 缺乏牛行为学的影响  26-27
    1.3.2 维生素 A 缺乏对血液学的影响  27
  1.4 小结  27-29
试验二维生素 A 缺乏致盲肉牛眼底变化的研究  29-33
  1.1 材料与方法  29-30
    1.1.1 试验动物与器材  29
    1.1.2 主要试剂及配制  29
    1.1.3 试验方法  29-30
    1.1.4 眼底图片观察与分析  30
  1.2 结果与分析  30-31
  1.3 讨论  31-32
    1.3.1 眼底照相技术临床运用上的意义  31-32
    1.3.2 眼底照相技术展望  32
  1.4 小结  32-33
试验三牛眼球标本石蜡切片方法的建立及维生素 A 缺乏牛组织学研究  33-39
  1.1 材料与方法  33-35
    1.1.1 试验材料  33
    1.1.2 主要仪器设备  33
    1.1.3 主要试剂及配制  33-34
    1.1.4 试验方法  34-35
    1.1.5 切片观察与分析  35
  1.2 结果与分析  35-36
    1.2.1 正常牛不同固定方法效果比较  35
    1.2.2 正常牛与维生素 A 缺乏牛组织切片观察结果  35-36
  1.3 结论与讨论  36-38
    1.3.1 两种固定及脱水方法对组织切片的影响  36-37
    1.3.2 正常牛和维生素 A 缺乏牛眼球组织病理学的差异  37-38
  1.4 小结  38-39
试验四维生素 A 相关蛋白在眼球分布的研究  39-44
  1.1 材料与方法  39-40
    1.1.1 试验材料  39
    1.1.2 主要仪器设备  39
    1.1.3 主要试剂及配制  39-40
    1.1.4 试验方法  40
    1.1.5 数据分析  40
  1.2 结果与分析  40-41
    1.2.1 IRBP 和视蛋白在正常牛眼球各组织分布规律的研究  40
    1.2.2 维生素 A 缺乏牛和正常牛眼组织中 IRBP 和黑视蛋白表达量的研究  40-41
  1.3 讨论  41-43
    1.3.1 牛眼球各组织 IRBP、黑视蛋白分布规律  41-42
    1.3.2 正常牛和维生素 A 缺乏牛 IRBP、视蛋白表达量的影响  42-43
  1.4 小结  43-44
创新点  44-45
参考文献  45-55
英文摘要  55-58
在读期间发表论文  58-59
图版与说明  59-76

维生素A缺乏致盲肉牛眼底变化及相关蛋白分布规律的研究

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