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酪酪肽卵黄抗体的制备及其对小鼠的营养生理效应研究

作　者: 李玉莲
导　师: 范志勇
学　校: 湖南农业大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 酪酪肽 卵黄抗体 抗原剂量 免疫间隔期 蛋鸡
分类号: S852.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


本试验通过考察抗原剂量和间隔期两个因素对酪酪肽卵黄抗体制备效果的影响,旨在建立一套制备酪酪肽卵黄抗体的完整方法,在此基础上,对酪酪肽卵黄抗体粉的营养生理效应进行了初步考察。本研究主要由3个试验组成：试验一酪酪肽完全抗原的制备本试验旨在考察戊二醛法制备酪酪肽完全抗原的可行性。试验通过将酪酪肽和牛血清白蛋白偶联形成酪酪肽完全抗原,再经电泳检测抗原偶联情况。结果表明：利用戊二醛法成功制备酪酪肽完全抗原。利用戊二醛法制成的酪酪肽完全抗原可以用于下一步酪酪肽卵黄抗体的制备。试验二PYY卵黄抗体的制备及抗体活性检测本试验旨在建立一套制备酪酪肽卵黄抗体的完整方法。试验在初免相同处理基础上,加免采取两因素交差试验设计,选择免疫抗原剂量(A)和免疫间隔(B)两个因素,每个因素分别设置3个水平(A：100μ,g/只、200μg/只、400μg/只；B：7d、11d、15d),构成9个组合,加上1个空白对照组,总计10个处理,每个处理5个重复,每个重复1羽。选择体重相近、健康的300日龄矮脚黄蛋鸡50羽,随机分入10个处理中。试验免疫程序如下：(1)预饲一周后进行初次免疫；所有免疫组抗原剂量均为200μg/只,胸肌多点注射油乳苗；(2)强化免疫阶段,具体注射抗原剂量与间隔按照试验设计进行操作。蛋鸡进入免疫程序后,每隔一周收集鸡蛋一次,采用ELISA法检测卵黄中酪酪肽抗体活性。结果表明：各处理组卵黄中酪酪肽抗体首次被检测到均在初免后第21天,表现出较强的一致性。在初免基础上,以加免100μg/kg、免疫间隔期15天、累计免疫4次的免疫程序对PYY卵黄抗体的生成效果最为突出,其抗体效价可达1：4096。试验三日粮中添加酪酪肽卵黄抗体对小鼠的营养生理效应研究本试验旨在探讨酪酪肽卵黄抗体对小鼠生长和血液相关激素水平的影响。根据考察因素不同,试验设对照组、脂多糖组、脂多糖+酪酪肽卵黄抗体组(试验Ⅰ组)和3个不同水平酪酪肽卵黄抗体添加组(试验Ⅱ组、试验Ⅲ组和试验Ⅳ组),共计6个处理,每个处理5个重复,每个重复6只小鼠。选21日龄体重相近、健康的雄性昆明小鼠180只,随机分入上述6个处理中。其中,空白组和脂多糖组小鼠均饲喂基础日粮,试验Ⅰ组在基础日粮中添加80mg/kg酪酪肽卵黄抗体粉,试验Ⅱ组、试验Ⅲ组和试验Ⅳ组分别在基础日粮中添加酪酪肽卵黄抗体粉80mg/kg、40mg/kg、80mg/kg和160mg/kg,试验为期28天。期间脂多糖组和试验Ⅰ组小鼠分别在试验第7d、10d、17d、20d早上8点腹腔注射LPS200μg/kgBW。结果表明：(1)在正常小鼠日粮中添加一定量的酪酪肽卵黄抗体粉有改善小鼠生长性能的趋势。与对照组相比,添加40mg/kg酪酪肽卵黄粉在试验0-7d、8-17d和18-28d小鼠平均日采食量分别提高了4.50%、7.03%和11.23%；添加160mg/kg酪酪肽卵黄粉小鼠平均日增重在试验0-7d和18-28d分别提高了3.92%和13.33%。(2)与对照组相比,在正常小鼠日粮中添加160mg/kg酪酪肽卵黄抗体粉可以显著降低酪酪肽和神经肽Y水平(P<0.05)。(3)小鼠日粮中添加一定量的酪酪肽卵黄抗体粉,在试验18-28d瘦素和胰岛素水平显著升高(P<0.05)。(4)在慢性应激小鼠基础日粮中添加80mg/kg酪酪肽卵黄抗体粉可以一定程度缓解应激对小鼠生长的不良影响。综上所述,本试验酪酪肽完全抗原和酪酪肽卵黄抗体的制备方案正确,技术路线合理可行,其中酪酪肽卵黄抗体制备过程中,以初免200μg/只,加免100μg/只,免疫间隔15天,共免疫4次的免疫程序为最佳方案。制备所得的酪酪肽卵黄抗体能够有效促进小鼠生长和机体代谢,对不良应激刺激造成的机体创伤具有一定程度的缓解效果。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-13
第一章 文献综述  13-26
  1 引言  13-14
  2 PYY主要生物学特性和生理学功能  14-18
    2.1 PYY及其受体  14-16
      2.1.1 PYY的结构  14-15
      2.1.2 PYY的分泌与分布  15
      2.1.3 PYY的受体  15-16
    2.2 PYY生理学功能  16-18
      2.2.1 PYY对摄食的调节  16
      2.2.2 PYY对消化系统功能的影响  16-17
      2.2.3 PYY对物质代谢的影响  17
      2.2.4 PYY的其他功能  17-18
  3 免疫调控技术在畜禽采食量中的应用  18-21
    3.1 免疫调控技术概述  18
    3.2 主动免疫技术  18-19
      3.2.1 人工重组抗原  18-19
      3.2.2 基因工程疫苗  19
    3.3 被动免疫技术  19-21
      3.3.1 血清抗体  19-20
      3.3.2 卵黄抗体  20-21
  4 卵黄抗体制备影响因素及应用前景  21-24
    4.1 卵黄抗体制备  21
    4.2 卵黄抗体制备影响因素  21-23
      4.2.1 禽本身因素对卵黄抗体制备的影响  21-22
      4.2.2 免疫方案对卵黄抗体制备的影响  22-23
        4.2.2.1 佐剂  22
        4.2.2.2 注射途径  22-23
        4.2.2.3 免疫剂量  23
        4.2.2.4 免疫次数和间隔期  23
    4.3 卵黄抗体应用前景  23-24
  5 研究目的意义  24-25
  6 试验流程  25-26
第二章 试验研究  26-60
  试验一 PYY-BSA完全抗原的制备  26-30
    1 材料与方法  26-28
      1.1 试验材料  26
        1.1.1 主要试剂  26
        1.1.2 主要仪器  26
      1.2 试验方法  26-28
        1.2.1 PYY-BSA完全抗原的制备  26
        1.2.2 PYY与BSA交联复合物的鉴定  26-27
          1.2.2.1 电泳储存液配制  26-27
          1.2.2.2 样品处理与加样  27
          1.2.2.3 电泳  27
          1.2.2.4 染色与脱色  27
        1.2.3 油乳疫苗制备  27-28
        1.2.4 包被抗原的制备  28
    2 结果与分析  28
    3 讨论  28-29
    4 结论  29-30
  试验二 PYY卵黄抗体的制备及抗体活性检测  30-42
    1 材料与方法  30-33
      1.1 试验材料  30
        1.1.1 试验动物  30
        1.1.2 主要试剂  30
        1.1.3 主要仪器  30
      1.2 试验方法  30-33
        1.2.1 试验动物分组及饲养管理  30
        1.2.2 免疫程序  30-31
        1.2.3 样品采集  31
        1.2.4 PYY卵黄抗体活性检测  31-32
        1.2.5 PYY混合卵黄抗体粉的制备及效价检测  32-33
        1.2.6 数据分析  33
    2 结果与分析  33-38
      2.1 蛋鸡免疫后卵黄中PYY抗体的产生规律  33-38
      2.2 PYY混合卵黄粉抗体的效价  38
    3 讨论  38-40
      3.1 蛋鸡免疫后卵黄中PYY抗体的产生规律  38-40
      3.2 PYY混合卵黄粉抗体的效价  40
    4 结论  40-42
  试验三日粮中添加PYY卵黄抗体对小鼠的营养生理效应研究  42-60
    1 材料与方法  42-43
      1.1 试验材料  42
        1.1.1 PYY卵黄抗体粉  42
        1.1.2 试验动物  42
      1.2 试验方法  42-43
        1.2.1 试验设计  42
        1.2.2 试验日粮  42
        1.2.3 饲养管理  42-43
        1.2.4 血样采集  43
        1.2.5 考察指标  43
          1.2.5.1 生长性能  43
          1.2.5.2 代谢相关产物水平测定  43
          1.2.5.3 血液内分泌激素水平测定  43
        1.2.6 数据分析  43
    2 结果与分析  43-53
      2.1 不同处理对小鼠生长性能的影响  43-45
        2.1.1 不同处理对小鼠平均日采食量的影响  43-44
        2.1.2 不同处理对小鼠平均日增重的影响  44-45
      2.2 不同处理对小鼠代谢相关产物的影响  45-49
        2.2.1 不同处理对小鼠血清尿素氮浓度的影响  45
        2.2.2 不同处理对小鼠血糖浓度的影响  45-46
        2.2.3 不同处理对小鼠血脂浓度的影响  46-49
      2.3 对小鼠血液内分泌激素水平的影响  49-53
        2.3.1 注射LPS对小鼠血清IL-6水平的影响  49
        2.3.2 不同处理对小鼠血清PYY和NPY水平的影响  49-50
        2.3.3 不同处理对小鼠血清瘦素和胰岛素水平的影响  50-53
    3 讨论  53-59
      3.1 不同处理对小鼠生长性能的影响  53-54
      3.2 不同处理对小鼠代谢相关产物的影响  54-56
      3.3 不同处理对小鼠血液内分泌激素水平的影响  56-59
        3.3.1 注射LPS对小鼠血液IL-6的影响  56-57
        3.3.2 不同处理对小鼠血清PYY和NPY水平的影响  57-58
        3.3.3 不同处理对小鼠血清瘦素和胰岛素水平的影响  58-59
    4 结论  59-60
参考文献  60-69
致谢  69-70
作者简介  70-71
附录  71

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜免疫学
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