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东北红豆杉体细胞胚的高效诱导与悬浮培养技术

作　者: 赵欣
导　师: 张宗申
学　校: 大连工业大学
专　业: 发酵工程
关键词: 红豆杉 体胚 植物激素
分类号: S791.49
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 9次
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内容摘要


本研究分别以东北红豆杉的幼嫩茎段和种子为材料，研究了植物激素、光照、谷氨酰胺等因素对体细胞胚诱导、增殖、发育后熟中的影响，优化了体胚的诱导与培养条件，初步建立东北红豆杉体胚高效诱导与悬浮培养技术体系。1.采用液体悬浮培养方法，以东北红豆杉幼茎为材料诱导胚性愈伤组织。最适培养基为：B5+3.0mg/L NAA+0.2mg/L6-BA液体悬浮培养。培养条件：温度为22℃，90rpm，蔗糖30g/L，pH5.8，暗培养。生长周期为2025d2.液体胚性愈伤组织的发育与成熟培养基为：B5+2.0mg/LNAA+0.2mg/L6-BA，培养条件：温度为22℃，90rpm，蔗糖30g/L，pH5.8，暗培养。24d后转接到固体B5+3.0mg/L ABA固体培养基上，1500lx光照培养55d，体胚发育成熟。3.不同的光照强度对体胚诱导和发育有一定的影响。在体胚发育后期，光照过强会导致体胚逐渐枯萎变黄，但光照强太弱，体胚叶绿体细胞发育不完善，不利于体胚成熟，试验表明，1500lx光照比较合适体胚的发育和成熟。4.较大的转速下培养，细胞易褐化，转接过程中胚性细胞损失过多；较低的转速下培养，细胞发育缓慢。故选择90rpm为适合的培养转速。5.种子诱导体胚的途径中，先将处理过的种子转接到无激素培养基上预培养10d后再转接到B5+2.0mg/L NAA+0.5mg/L2,4-D+400mg/L谷氨酰胺固体培养上暗培养，诱导率高达78.36%。培养条件：pH6.0，温度22℃，周期40d。6.种胚愈伤组织增殖最适培养基为B5+NAA1.0mg/L+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.1mg/L+400mg/L谷氨酰胺，暗培养条件下，25d内的增殖率为85.3%。7.将诱导的种胚胚性愈伤组织转接到B5+3.0mg/L ABA固体培养基上，1500lx光照20d后，转接到无激素培养基，即可发育成熟。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-10
第一章 文献综述  10-24
  1.1 东北红豆杉  10-14
    1.1.1 红豆杉的形态特征  10-11
    1.1.2 红豆杉的分布  11-12
    1.1.3 红豆杉的有效成分及药理作用  12
    1.1.4 红豆杉资源开发及相关生物技术应用研究进展  12-14
      1.1.4.1 红豆杉的栽培  13
      1.1.4.2 红豆杉的组织培养研究  13-14
  1.2 红豆杉体细胞胚的诱导  14-17
    1.2.1 体细胞胚的研究概况  14-17
      1.2.1.1 体细胞胚的类型  14-15
      1.2.1.2 诱导体细胞胚胎发生的一般程序  15-16
      1.2.1.3 体胚发育的形态学变化  16
      1.2.1.4 影响体细胞胚发生的因素  16-17
  1.3 东北红豆杉种子休眠与解除  17-20
    1.3.1 东北红豆杉种子休眠  17-18
      1.3.1.1 内源抑制物  18
      1.3.1.2 胚的发育情况  18
    1.3.2 东北红豆杉种子休眠的解除  18-20
      1.3.2.1 激素处理  19
      1.3.2.2 温度处理  19
      1.3.2.3 机械处理  19
      1.3.2.4 层积处理  19
      1.3.2.5 综合方法  19-20
  1.4 褐变  20-23
    1.4.1 褐变的定义  20
    1.4.2 褐变的成因  20
    1.4.3 褐变的机理  20-21
    1.4.4 影响褐化的因素  21-22
    1.4.5 防止褐化的措施  22-23
  1.5 展望  23-24
第二章 材料和方法  24-29
  2.1 试验材料  24
  2.2 试验试剂  24
  2.3 试验方法  24-29
    2.3.1 通过愈伤组织途径诱导体胚  24-27
      2.3.1.1 愈伤组织的诱导  24-25
      2.3.1.2 固体培养基上体胚的诱导  25
      2.3.1.3 液体培养基上体胚的诱导  25-26
      2.3.1.4 体胚的发育  26
      2.3.1.5 体胚的成熟  26
      2.3.1.6 光对体胚诱导的影响  26
      2.3.1.7 转速对体胚诱导的影响  26-27
    2.3.2 通过东北红豆杉种子途径诱导体胚  27-29
      2.3.2.1 种子的的检测  27
      2.3.2.2 胚性愈伤组织的诱导  27
      2.3.2.3 胚性愈伤组织增殖  27-28
      2.3.2.4 胚性愈伤组织的发育  28
      2.3.2.5 其他因素对体胚的影响  28-29
第三章 结果与讨论  29-43
  3.1 通过愈伤组织途径诱导体胚  29-35
    3.1.1 愈伤组织诱导  29
    3.1.2 固体培养基上体胚的诱导  29-30
    3.1.3 液体培养基上体胚的诱导  30-33
    3.1.4 胚性愈伤组织的发育与成熟  33-34
    3.1.5 光对体胚诱导的影响  34-35
    3.1.6 转速对体胚诱导的影响  35
  3.2 通过种子途径诱导体胚  35-43
    3.2.1 种胚胚性愈伤组织的诱导  35-37
    3.2.2 胚性愈伤组织的增殖  37-39
    3.2.3 胚性愈伤组织的发育成熟  39-40
    3.2.4 其他因素对种胚的影响  40-41
    3.2.5 两条途径的比较  41-43
      3.2.5.1 体细胞胚发生过程  41
      3.2.5.2 生长周期  41
      3.2.5.3 影响因素  41-43
第四章 结论  43-44
参考文献  44-48
致谢  48

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中图分类: > 农业科学 > 林业 > 森林树种 > 针叶树类 > 红豆杉、紫杉
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