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枇杷大胚芽植株的遗传多样性研究

作　者: 察伟丽
导　师: 王永清
学　校: 四川农业大学
专　业: 果树学
关键词: 枇杷 遗传多样性 大胚芽植株
分类号: S667.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


本研究以四川农业大学园艺植物生物技术中心培育的大胚芽枇杷植株为实验材料,通过田间形态学观察测量对供试材料进行聚类分析；采用根尖压片法统计大胚芽枇杷植株的染色体数目；采用改良的CTAB法获得高质量的DNA,对枇杷的RAPD反应体系进一步优化,筛选适合本研究的反应条件和随机引物,对材料进行聚类分析并计算相似系数。主要研究结果如下：1.通过田问对120份大胚芽枇杷植株进行形态学测量统计。结果表明,这些材料在叶姿、叶片形状、叶长、叶宽、叶尖形状、叶缘形状、叶缘锯齿深浅、叶片颜色、叶脉、叶面形态、叶片质地等方面均存在一定的差异。2.采用根尖压片法对大胚芽枇杷植株的染色体进行计数。结果表明,这些材料均未出现多倍体,即胚芽的大小与植物的染色体倍性无关。3.采用改良的CTAB法对大胚芽枇杷材料基因组DNA进行提取,成功地从新鲜的枇杷叶片中提取DNA,经分析表明,改良后的CTAB提取的DNA产率较高,OD260/0D280的比值均在1.85-2.03之间,说明所提取的DNA可以用于后面RAPD的分析。通过电泳结果可以看出,提取出来的DNA质量较好,比较完整。4.采用五因素五水平正交试验设计,建立枇杷RAPD分析的优化反应体系。所得最佳反应体系为：2.5μL10×buffer,2.Ommol/L Mg2+,1.2UTaq酶,0.3μmol/L引物,50ng模板DNA,0.20mmol/LdNTP,无菌水补足25μL。反应程序为94℃C预变性5min；94℃变性1min,38℃退火1min,72℃延伸1.5min,40次循环；72℃延伸7min,4℃保存。5.利用优化好的最佳体系从100条随机引物中筛选,最终经过三次重复,得到多态性好、扩增重复性好、谱带清晰且较多的11个引物。利用这11个引物对枇杷大胚芽植株群体和母株的DNA样品进行扩增,共扩增出了119条谱带,平均每条引物为10.8条,其中104条为多态性带,占总条带数的87.4%,平均为每个引物9.5条多态性带。根据扩增结果得到UPGMA聚类图,将120份单株划分为4大类。6.通过POPGENE1.32软件的分析,获得了大胚芽植株群体Nei基因多样度指数和Shannon多样性信息含量指数。枇杷大胚芽植株群体内遗传多样性较高,同时,存在一定量的变异单株,这为今后枇杷选育新品种提供了丰富的原材料,也为后续研究奠定了基础。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-8
1 文献综述  8-13
  1.1 枇杷的分布和栽培情况  8
  1.2 我国枇杷属植物的分类  8-9
  1.3 枇杷属植物遗传多样性的研究与发展  9-13
    1.3.1 枇杷属植物形态学标记的遗传多样性  9-10
    1.3.2 枇杷属植物孢粉学标记的遗传多样性  10
    1.3.3 枇杷属植物细胞学标记的遗传多样性  10
    1.3.4 枇杷属植物生化标记的遗传多样性  10-11
    1.3.5 枇杷属植物分子标记的遗传多样性  11-13
2 目的和意义  13
3 材料与方法  13-22
  3.1 材料  13-14
  3.2 试剂  14-15
  3.3 仪器  15-16
  3.4 方法  16-22
    3.4.1 基于叶形态的遗传多样性研究  16-17
    3.4.2 基于染色体的研究—染色体标本的制备及对供试材料的倍性鉴定  17-19
    3.4.3 基于RAPD分子标记的研究——DNA的提取与质量检测  19-20
    3.4.4 基于RAPD分子标记的研究——RAPD的反应  20-22
4 结果与分析  22-35
  4.1 基于叶形态的结果与分析  22-27
  4.2 基于染色体的研究的结果与分析  27-29
  4.3 基于分子标记的结果与分析  29-35
    4.3.1 采用改良的CTAB法提取的DNA的质量检测  29
    4.3.2 RAPD反应体系的建立与优化  29-30
    4.3.3 适用于枇杷RAPD反应的引物的筛选及扩增结果  30-33
    4.3.4 遗传多样性分析  33
    4.3.5 相似系数分析  33
    4.3.6 聚类分析  33-35
5 讨论  35-39
  5.1 有关形态学的讨论  35
  5.2 有关染色体的讨论  35-36
  5.3 有关RAPD分子标记及其揭示的枇杷大胚芽植株遗传多样性的讨论  36-38
  5.4 利用枇杷大胚芽植株作为育种材料的可行性分析  38-39
6 小结  39-41
致谢  41-43
参考文献  43-47
附表  47-53

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 果树园艺 > 热带及亚热带果类 > 枇杷
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