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荣保灵芝1号的分离鉴定及灵芝子实体不同部位主要药用成分含量分析

作　者: 董了瑜
导　师: 陈强
学　校: 四川农业大学
专　业: 土壤学
关键词: 灵芝 RAPD ITS 农艺性状 药用成分
分类号: S567.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


本研究分离纯化获得了一株野生灵芝,将其命名为荣保灵芝1号。采用RAPD和ITS序列分析方法,对荣保灵芝1号和其他灵芝主要栽培品种的遗传学特性及分类地位进行了分析,并对其农艺性状进行了研究。同时,本研究对不同品种灵芝子实体不同部位的主要药用成分含量进行了分析。获得了以下结果：1.从四川省广元、雅安、攀枝花、峨眉等县市收集到野生灵芝资源5份,经分离纯化、生长特性分析,最终筛选出了一株具生产应用前景的灵芝品种,命名为荣保灵芝1号。RAPD分析表明,荣保灵芝1号与灵芝主要栽品种问存在着遗传差异,进而,分析了荣保灵芝1号的ITS序列,长度为655bp,应用MEGA5.0建立了供试菌株的ITS系统发育树,荣保灵芝1号属于灵芝属的赤芝(G.Lingzhi)系统发育分支。2.对荣保灵芝1号的农艺性状进行了研究,该菌株的菌丝体生长温度范围为15-35℃,最适生长温度为25-30℃；初始生长范围为pH4-9,适宜pH范围5-7；最佳母种培养基是PDA加富培养基；最适原种和栽培种配方为杂木屑73%,麦麸20%,玉米粉5%,过磷酸钙1%,石膏1%。3.采用蒽酮-硫酸法测定了荣保灵芝1号、南韩灵芝、美国灵芝、日本灵芝不同部位(菌肉、菌管和菌柄)灵芝多糖的含量。结果表明,子实体灵芝多糖总含量分别为南韩灵芝0.7994%,美国灵芝0.7737%,荣保灵芝1号0.7560%,日本灵芝0.6970%,不同品种差异较小；各个灵芝品种的多糖主要分布在菌管,约占40-50%,菌肉和菌柄中灵芝多糖低于菌管。4.探讨了HPLC法测定灵芝酸A含量的条件,测定了4个灵芝品种不同部位的芝酸A含量。色谱条件为：UltimateTM XB-C18色谱柱,柱温为25℃,流动相为乙腈(B)-醋酸水(A),梯度洗脱为：0min20%B,5min36%B,40min37%B,50min80%B,60min90%B,流速：0.800ml/min,检测波长：254nm。结果显示,荣保灵芝1号菌肉灵芝酸A含量为4.50mg/g,高于其他品种,其子实体不同部位灵芝酸A的含量顺序为：菌肉>菌柄>菌管。5.探讨了HPLC法测定灵芝子实体4种核苷类成分(尿嘧啶核苷、肌苷、鸟苷、腺苷)含量的条件,测定了4个灵芝品种不同部位的4种核苷含量。色谱条件为UltimateTM XB-C18色谱柱,柱温25℃,流动相为甲醇(B)-0.1%醋酸水(A),梯度洗脱为:0min1%B,60min5%B,流速：1.000ml/min,检测波长：254nm。品种中4种核苷类成分的含量分别为菌管>菌肉>菌柄,肌苷只在荣保灵芝1号中测出,为0.100mg/g,4种核苷类成分含量的总量为：南韩灵芝(1.728mg/g)>美国灵芝(1.592mg/g)>日本灵芝(1.569mg/g)>荣保灵芝1号(0.523mg/g)

全文目录


摘要  5-7
ABSTRACT  7-11
1 文献综述  11-20
  1.1 引言  11
  1.2 灵芝的鉴别  11-12
    1.2.1 形态鉴别  11-12
    1.2.2 显微鉴别  12
    1.2.3 薄层鉴别  12
    1.2.4 质量鉴别  12
  1.3 灵芝遗传特性及分类地位的研究  12-15
    1.3.1 ITS序列分析  12-13
    1.3.2 RAPD技术  13-14
    1.3.3 AFLP技术  14-15
  1.4 灵芝产品  15
  1.5 灵芝的有效成分及药理功效  15-17
    1.5.1 灵芝的有效成分  15-16
    1.5.2 灵芝的药理功效  16-17
  1.6 灵芝主要有效成分含量的分析  17-19
    1.6.1 多糖的含量  18
    1.6.2 灵芝酸、核苷类成分的含量  18-19
  1.7 本研究目的及意义  19-20
2 材料与方法  20-28
  2.1 野生灵芝菌种分离及纯化  20
  2.2 荣保灵芝1号遗传特性研究  20-23
    2.2.1 供试菌株  20
    2.2.2 菌丝培养  20
    2.2.3 DNA的提取  20-21
    2.2.4 RAPD分析  21-22
    2.2.5 ITS扩增及序列分析  22-23
  2.3 荣保灵芝1号的农艺性状研究  23-24
    2.3.1 生长温度范围  23
    2.3.2 生长pH范围  23
    2.3.3 母种培养基  23
    2.3.4 原种培养基  23-24
    2.3.5 子实体形成及形态分化  24
  2.4 主要药用成分含量分析  24-28
    2.4.1 仪器和材料  24-25
    2.4.2 分光光度法测定灵芝多糖的含量  25-26
    2.4.3 HPLC法测定灵芝酸A的含量  26-27
    2.4.4 HPLC分析核苷类成分含量  27-28
3 结果与分析  28-45
  3.1 荣保灵芝1号遗传特性及分类地位  28-30
    3.1.1 RAPD分析  28
    3.1.2 ITS序列分析  28-30
  3.2 荣保灵芝1号的农艺性状  30-33
    3.2.1 菌丝生长温度范围  30-31
    3.2.2 菌丝生长pH范围  31
    3.2.3 母种培养基  31-32
    3.2.4 原种培养基  32
    3.2.5 荣保灵芝1号出芝温度范围  32-33
  3.3 灵芝主要药用成分含量分布  33-45
    3.3.1 分光光度法测得灵芝多糖的含量  33-35
    3.3.2 HPLC法测定灵芝酸A含量  35-39
    3.3.3 HPLC法测定灵芝子实体不同部位核苷类成分含量  39-45
4 全文总结  45-47
参考文献  47-52
致谢  52

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 药用作物 > 菌类 > 灵芝
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