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贵州辣椒疫霉病菌群体遗传结构及生理小种鉴定

作　者: 陈龙
导　师: 王云月
学　校: 云南农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 辣椒疫霉交配型遗传多样性生理小种
分类号: S436.418
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

辣椒疫病是由辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici Leon）侵染引起的一种土传真菌病害。随着辣椒产业的发展壮大、不同品种的大力推广以及栽培措施的强化，该病已在全国普遍发生，造成严重的经济损失。因此，深入了解辣椒疫霉菌交配型组成与分布、群体遗传结构和生理小种的动态变化情况，对抗病品种选育、品种合理布局与轮换都有十分重要的指导意义。本研究于2012年7月-9月间，从贵州省四大辣椒主产区所属10余个县乡，共采集辣椒疫病标样66份，分离得到178个单孢菌株。根据采样点病原菌寄主品种、辣椒种植面积及发病情况等因素从中选取44个代表菌株，加上贵州省植物保护研究所保存于2004年、2007年、2009年的28个辣椒疫霉菌株，共计72株进行交配型测定及群体遗传结构的RAPD分析；结合遗传宗谱划分，挑选49个代表菌株进行生理小种鉴定。主要结果如下：1、采用单孢菌落直接配对法对供试菌株进行交配型鉴定，共发现三种交配型，即A1、A2和A1,A2，其中以A2为主，占调查总数的88.9%，广泛分布于各辣椒主产区；而A1和A1,A2两种交配型是在2012年首次检测到。同一田块同一植株上可以分离到不同交配型菌株，表明贵州辣椒疫病菌株遗传变异增大，应该加强其生理小种的检测，关注小种的动态变化。2、利用所筛选的31个RAPD标记对72个供试菌株进行遗传多样性分析，共扩增出329条DNA指纹条带，不同引物扩增的条带数为6~17条，平均为10.6条，其中多态性条带有317条，多态率为96.35%，表明贵州辣椒疫霉菌具有丰富的遗传多样性。各地区菌株种群香浓指数在0.1142～0.4244之间，平均为0.2224；其顺序为：贵阳（0.4244）＞遵义（0.2995）＞毕节（0.1926）＞黔南（0.1822）＞安顺（0.1206）＞六盘水（0.1142）。聚类分析结果表明，在0.78遗传相似水平下，供试的72个辣椒疫霉菌被划分为7个遗传宗群，各宗群与菌株的地理分布及寄主品种有一定的相关性。3、利用亚洲蔬菜研究与发展中心提供的一套鉴别寄主，对49个菌株进行生理小种鉴定。结果表明：贵州辣椒主产区共检测到Race1、Race2、Race3和Race4四种生理小种，发生频率分别为20.41%、20.41%、50.02%和8.16%，其中Race3为优势小种；不同年份小种的消长发生了动态变化。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-10
1 前言  10-19
  1.1 辣椒疫病的发生与危害  10-11
  1.2 辣椒疫霉菌致病力及生理分化  11-14
  1.3 辣椒疫霉菌交配型研究  14-15
  1.4 辣椒疫病抗病性鉴定方法研究进展  15-16
  1.5 分子指纹技术在辣椒疫霉菌群体结构分析中的应用  16-17
  1.6 研究目的和意义  17-19
2 材料与方法  19-28
  2.1 实验材料  19-22
    2.1.1 供试菌株  19-21
    2.1.2 生理小种鉴别寄主  21-22
    2.1.3 实验试剂  22
    2.1.4 仪器设备  22
  2.2 实验方法  22-28
    2.2.1 培养基制备  22-23
    2.2.2 辣椒疫病菌株分离及保存  23-24
    2.2.3 菌株复壮  24
    2.2.4 交配型测定  24
    2.2.5 交配型确定标准  24-25
    2.2.6 菌丝培养  25
    2.2.7 菌丝基因组的 DNA 提取  25
    2.2.8 菌株基因组 DNA 的检测  25
    2.2.9 菌株基因组 DNA 的 RAPD-PCR 扩增  25-26
    2.2.10 辣椒疫霉菌生理小种鉴定  26-28
3 结果与分析  28-44
  3.1 辣椒疫霉菌株单孢分离  28-29
  3.2 贵州辣椒疫霉菌交配型测定结果  29-33
    3.2.1 贵州辣椒疫霉的交配型组成  29-32
    3.2.2 贵州不同地区的辣椒疫霉交配型分布与发生频率  32-33
    3.2.3 不同年份贵州辣椒疫霉的交配型变化  33
  3.3 供试菌株全基因组 DNA 的提取  33-34
  3.4 辣椒疫霉菌群体的 RAPD 分析  34-39
    3.4.1 引物的筛选  34-35
    3.4.2 不同地理来源辣椒疫霉菌的遗传多样性  35-36
    3.4.3 不同地理来源辣椒疫霉菌的遗传相似性  36-37
    3.4.4 菌株 RAPD 聚类分析  37-39
  3.5 辣椒疫霉菌生理小种鉴定分析  39-44
    3.5.1 不同时期贵州辣椒疫霉菌生理小种组成变化  42
    3.5.2 2012 年贵州不同地区辣椒疫霉菌生理小种分布  42-44
4 讨论  44-47
  4.1 贵州省辣椒疫霉菌群体交配型组成和分布的讨论  44
  4.2 菌株复壮的必要性  44-45
  4.3 贵州辣椒疫霉菌群体遗传多样性的 RAPD 分析  45
  4.4 辣椒疫霉菌生理小种鉴定结果  45-47
5 结论  47-48
参考文献  48-54
致谢  54

贵州辣椒疫霉病菌群体遗传结构及生理小种鉴定

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