学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

大豆疫霉菌（Phytophthora sojae）抗甲霜灵菌株生物学特性及AFLP分析

作　者: 国莉玲
导　师: 左豫虎
学　校: 黑龙江八一农垦大学
专　业: 植物病理学
关键词: 大豆疫霉菌抗甲霜灵菌株生物学特性 AFLP 多态性 SCAR
分类号: S435.651
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
下　载: 6次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本研究以大豆疫霉野生菌株Pmg1为亲本，采用药剂驯化法获得抗甲霜灵菌株。初步研究抗药菌株的抗性水平、抗性的稳定性、菌落生长速率、菌落形态、游动孢子囊和卵孢子产生能力等生物学特性，并利用光学显微镜观察其菌丝、游动孢子囊和卵孢子的形态。应用64对引物组合对筛选到的抗药菌株及其野生亲本的基因组DNA进行AFLP分析。取得以下研究结果：1.获得5株抗甲霜灵菌株Pmg1-Mtr1、Pmg1-Mtr2、Pmg1-Mtr3、Pmg1-Mtr4、Pmg1-Mtr5，抗性水平在野生亲本的3793.7-5773.9倍之间。2.抗药菌株的抗药性可在菌丝阶段稳定遗传；抗性菌株的第一代、第二代、第三代游动孢子单孢株仍具有不同程度的抗性。3.与野生菌株Pmg1相比，抗药菌株的菌落生长速率有明显降低；菌丝、游动孢子囊和卵孢子在形态上与野生菌株相比没有明显变化，但抗药菌株游动孢子囊和卵孢子的产量有显著降低。4. AFLP分析共获得1087条条带，其中328条具有多态性，多态性百分比为30.17%，遗传相似系数为82%。差异片段E2M18152的延长序列与致病疫霉T30-4果糖二磷酸醛缩酶mRNA编码区序列的同源性为93%。5.根据3个较长差异片段的序列设计3对SCAR特异引物，并未在抗药菌株和野生亲本间扩增到具有长度多态性的片段，故没有成功地将AFLP标记转化为SCAR标记，但通过序列比对发现抗药菌株和野生亲本之间存在不同单碱基。以上研究结果表明，大豆疫霉菌对甲霜灵容易产生抗性，抗药菌株在菌丝阶段抗药性的保持对甲霜灵没有表现依赖性，且可在游动孢子后代遗传。抗药菌株除抗药性提高、游动孢子囊和卵孢子产生能力下降外，其它生物学性状没有发生显著变化。抗药菌株在分子水平上确实发生了变化，导致了多态性条带的出现，且抗药菌株与野生亲本在DNA水平上的差异在整个基因组上的分布是随机的，而这些差异可能与菌株抗性的形成有关。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-8
目录  8-11
第一章文献综述  11-32
  1.1 大豆疫霉根腐病  11-16
    1.1.1 大豆疫霉病概述  11-14
    1.1.2 大豆疫霉菌的遗传变异研究进展  14-16
  1.2 卵菌抗药性研究进展  16-21
  1.3 分子标记技术概述  21-30
    1.3.1 限制性酶切片段长度多态性标记(RFLP)  22-23
    1.3.2 随机扩增多态性 DNA 技术(RAPD)  23
    1.3.3 简单序列重复(SSR)  23-24
    1.3.4 单核苷酸多态性(SNP)  24
    1.3.5 特异性序列扩增(SCAR)  24-25
    1.3.6 扩增片段长度多态性（AFLP）  25-30
  1.4 研究的内容和目的意义  30-32
    1.4.1 研究内容  30
    1.4.2 目的和意义  30-32
第二章大豆疫霉菌抗甲霜灵菌株的筛选及部分生物学特性研究  32-44
  2.1 材料与方法  32-35
    2.1.1 供试菌株  32-33
    2.1.2 试剂  33
    2.1.3 培养基  33
    2.1.4 仪器  33
    2.1.5 野生菌株对甲霜灵的敏感性测定  33
    2.1.6 抗甲霜灵菌株的诱导筛选  33
    2.1.7 抗甲霜灵菌株的抗性水平测定  33-34
    2.1.8 抗药菌株的抗药性稳定性检测  34
    2.1.9 大豆疫霉抗性菌株对甲霜灵抗性在游动孢子后代的遗传  34
    2.1.10 抗药菌株的生长速率及菌落、菌丝形态  34-35
    2.1.11 游动孢子囊、卵孢子产生能力和形态观察  35
  2.2 结果与分析  35-42
    2.2.1 野生型菌株对甲霜灵的敏感性测定  35-36
    2.2.2 抗甲霜灵菌株的诱导  36
    2.2.3 抗甲霜灵菌株的抗性水平测定  36-37
    2.2.4 抗药菌株的稳定性检测  37-39
    2.2.5 大豆疫霉抗药菌株对甲霜灵抗性在游动孢子后代的遗传  39-40
    2.2.6 抗药菌株的生长速率及菌落、菌丝形态  40-41
    2.2.7 游动孢子囊、卵孢子产生能力和形态观察  41-42
  2.3 讨论  42-44
第三章大豆疫霉菌抗甲霜灵突变菌株的 AFLP 分析  44-68
  3.1 材料与方法  44-46
    3.1.1 供试菌株  44
    3.1.2 试剂  44-45
    3.1.3 培养基  45
    3.1.4 接头及引物  45-46
    3.1.5 仪器  46
  3.2 试验方法  46-55
    3.2.1 大豆疫霉野生菌株和抗药菌株基因组 DNA 的获取  46-48
    3.2.2 AFLP 反应体系  48-50
    3.2.3 AFLP-变性凝胶电泳  50-51
    3.2.4 数据统计及多态性分析  51
    3.2.5 差异条带的克隆  51-54
    3.2.6 差异条带测序及引物设计  54
    3.2.7 抗药突变体与野生菌相关基因的比对  54-55
  3.3 结果与分析  55-65
    3.3.1 大豆疫霉菌基因组 DNA 提取与质量分析  55-56
    3.3.2 大豆疫霉菌野生菌株与抗甲霜灵菌株 AFLP 指纹图谱分析  56-59
    3.3.3 差异条带的回收及检测  59-60
    3.3.4 差异条带的克隆  60-61
    3.3.5 差异条带的测序结果及设计引物  61-63
    3.3.6 AFLP 标记向 SCAR 标记的转换  63-65
  3.4 讨论  65-68
    3.4.1 AFLP 多态性分析  65
    3.4.2 差异片段分析  65-66
    3.4.3 关于 SCAR 标记转化  66-68
第四章结论  68-70
  4.1 大豆疫霉菌抗甲霜灵菌株的筛选及部分生物学特性研究  68
  4.2 AFLP 多态性及相关差异片段分析  68-69
  4.3 SCAR 标记的转化  69-70
参考文献  70-80
致谢  80-82
个人简历  82

大豆疫霉菌（Phytophthora sojae）抗甲霜灵菌株生物学特性及AFLP分析

内容摘要

全文目录

相似论文