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兰州市三叶草病毒病主要毒源种类鉴定及分子检测

作　者: 相栋
导　师: 徐秉良
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 三叶草 病毒病 症状类型 DAS-ELISA检测 发病条件 生物学测定 电子显微镜技术 RT-PCR检测
分类号: S435.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


三叶草作为一种重要的牧草和绿化植物，在生产上有着广泛的应用。苜蓿花叶病毒（AMV）和白三叶花叶病毒（WCMV）是侵染三叶草的主要病毒病原。本研究通过田间调查、DAS-ELISA、电镜技术、RT-PCR对侵染甘肃省白、红三叶草上的主要病毒种类、寄主组织生理病变、田间症状类型及发生条件进行了系统研究，为三叶草病毒病的田间检测奠定了基础。现将研究结果总结如下：1．2010—2012年对兰州市不同绿化带及试验种植区三叶草病毒病症状表现和发病情况进行了调查。田间调查表明，三叶草病毒病在调查区普遍发生，平均发病率为28.14%，病情指数为17.45，主要症状为黄斑花叶、斑驳花叶、花斑花叶、丛簇矮化、皱缩褪绿、环斑及环纹。白三叶草和红三叶草发病高峰期及表现症状明显不同，4月下旬到5月上旬白三叶草达到发病高峰，主要症状为黄斑花叶；6月红三叶草达到发病高峰，主要症状为花斑花叶、丛簇矮化。环境对三叶草病毒病发生有重要影响，当温度为25℃，相对湿度为45%时发病最重，病情指数分别为74.81、74.07。2.对调查区田间采集的具典型病毒病症状的白、红三叶草病叶经DAS-ELISA检测表明，侵染三叶草的主要病毒病原为苜蓿花叶病毒（AMV）和白三叶草花叶病毒（WCMV），检出率分别为100%、83.3%，复合侵染率为83.3%。寄主范围测定结果表明AMV可侵染昆诺藜、心叶烟、番茄、豇豆、豌豆、向日葵、鸡冠花等6科16种测试植物，主要症状为系统花叶、褪绿、枯斑等；WCMV寄主范围较狭窄，可侵染豌豆、菜豆、豇豆、苜蓿、昆诺藜等植物，主要症状为局部枯斑、系统褪绿等。3.电镜观察结果表明，AMV病毒粒体呈杆菌状或准等轴的长形，大小为18～20nm×58～18nm；WCMV病毒粒体呈弯曲线状，大小为480nm×13nm。病叶超薄组织观察显示，三叶草叶片感染病毒病后，细胞叶绿体内淀粉颗粒含量增多，片层结构疏松、混乱甚至解体；液泡扭曲萎缩；细胞质中存在杆菌状粒子并行排列的聚集体，同时含有线状粒子成束状的聚集体。4.对田间采集的具有典型病毒病症状的三叶草病叶，根据已报道的苜蓿花叶病毒（AMV）外壳蛋白核苷酸序列和白三叶草花叶病毒（WCMV）基因组序列设计PCR引物，通过RT-PCR分别扩增出与预期大小878bp和841bp相一致的片段，应用该方法分别对采自田间的4份白、红三叶草病样进行AMV、WCMV的带毒情况检测，结果表明， AMV检出率为100%， WCMV检出率为75%，复合侵染率为75%。

全文目录


摘要  2-4
Summary  4-8
前言  8-10
第一章 文献综述  10-22
  1 三叶草病毒病的研究进展  10-14
    1.1 苜蓿花叶病毒的研究现状  12-13
    1.2 白三叶花叶病毒的研究现状  13-14
  2 植物病毒检测技术研究  14-20
    2.1 生物学方法  15
    2.2 电子显微方法  15-16
    2.3 免疫学方法  16-17
    2.4 分子生物学方法  17-20
  3 本试验的主要研究内容和意义  20-22
    3.1 研究目的及意义  20-21
    3.2 研究内容  21-22
第二章 三叶草病毒病发生与症状类型  22-28
  1 材料与方法  22-23
    1.1 病害调查和毒源采集  22-23
    1.2 环境因素对三叶草病毒病发生的影响  23
  2 结果与分析  23-27
    2.1 三叶草病毒病田间发病情况  23-24
    2.2 田间症状类型  24-25
    2.3 三叶草病毒病田间发生流行动态  25-26
    2.4 环境因素对三叶草病毒病发生的影响  26-27
  3 结论与讨论  27-28
第三章 三叶草病毒病主要毒源种类研究  28-38
  1 材料与方法  28-31
    1.1 毒源采集和保存  28
    1.2 三叶草病毒的 ELISA 测定  28-30
    1.3 三叶草病毒分离与生物学测定  30-31
  2 结果与分析  31-36
    2.1 三叶草病毒病病原 DAS-ELISA 检测  31-32
    2.2 最适接种浓度的测定  32-33
    2.3 寄主反应和症状  33-36
  3 结论与讨论  36-38
第四章 三叶草病毒病病原形态与病生理研究  38-45
  1 材料与方法  38-41
    1.1 供试材料  38
    1.2 两种病毒的形态和寄主组织病变观察  38-41
    1.3 病毒侵染后对三叶草叶绿素含量的影响  41
  2 结果与分析  41-44
    2.1 病毒粒子形态和组织病变观察  41-43
    2.2 病毒侵染后对三叶草叶绿素含量的影响  43-44
  3 结论与讨论  44-45
第五章 三叶草病毒病 RT-PCR 分子检测  45-54
  1 材料与方法  45-48
    1.1 供试材料  45
    1.2 供试药剂  45
    1.3 植物总 RNA 的提取  45-46
    1.4 总 RNA 完整性、含量及纯度检测  46
    1.5 cDNA 的合成及 RT-PCR  46-48
  2 结果与分析  48-52
    2.1 总 RNA 完整性  48
    2.2 AMV RT-PCR 检测  48-49
    2.3 WCMV RT-PCR 检测  49-50
    2.4 侵染三叶草的 AMV、WCMV 序列分析  50-52
  3 结论与讨论  52-54
第六章 主要结论与创新点  54-56
  1. 主要结论  54-55
  2. 创新点  55-56
参考文献  56-62
致谢  62-64
作者简介  64-65
导师简介  65-66

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 农作物病虫害及其防治 > 饲料作物、牧草病虫害
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