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骨髓间充质干细胞促进肝大部切除大鼠肝再生的研究

作　者: 何秀华
导　师: 李东良
学　校: 福建医科大学
专　业: 内科学
关键词: 骨髓间充质干细胞 示踪 BrdU DAPI GFP 肝切除 细胞移植 肝再生 门静脉 尾静脉
分类号: R657.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:(1)探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)标记和示踪方法,优化示踪技术;(2)观察不同途径移植的骨髓间充质干细胞在肝大部切除大鼠剩余肝内定植及促进肝再生的作用。方法:(1)体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,通过流式细胞仪鉴定间充质干细胞表面抗原(CD29、CD34、CD45、CD90),分别用BrdU、DAPI以及GFP 3种方法标记干细胞,BrdU标记率通过细胞免疫化学鉴定,DAPI和GFP标记率直接通过荧光显微镜进行鉴定,对比观察三种示踪技术的优缺点。(2)建立肝大部切除(约70%)大鼠模型,分别经尾静脉和门静脉向肝切除大鼠移植DAPI标记的第三代骨髓间充质干细胞约1.5×106,单纯肝大部切除组作对照组,分别于术后3天、9天采血检测肝功能,9天后处死大鼠,取肝脏标本,免疫组织化学方法观察肝内Ki-67的表达及BrdU阳性细胞,并通过荧光显微镜观察两种移植途径对大鼠骨髓间充质干细胞向肝脏迁移的影响。结果:(1)流式细胞仪鉴定结果显示骨髓间充质干细胞CD29、CD90表达阳性,CD34、CD45表达呈阴性。3种标记方法对细胞均未显示明显毒性。终浓度为10μmol/L及标记48h、终浓度为1μg/ml及标记12h时分别为BrdU和DAPI的最佳标记浓度及时间。感染复数MOI=8时,GFP慢病毒感染MSCs12 h,感染率可达90%以上;(2)尾静脉移植组和门静脉移植组9天后肝功能显示ALB升高,且其差异有统计学意义(均P<0.05);尾静脉移植组和门静脉移植组肝组织Ki-67表达(103.30±40.44,95.82±26.67 vs 60.29±35.71个细胞/400倍视野)及BrdU阳性细胞(15.92±3.06,16.01±3.32 vs 11.63±3.74个细胞/400倍视野)升高,与对照组比较差异均具有统计学意义(均P<0.05);DAPI标记阳性的细胞在门静脉移植组(18.1±3.4个细胞/100倍视野)多于尾静脉移植组(7.6±2.0个细胞/100倍视野),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)GFP基因转染骨髓间充质干细胞,是一种明确、稳定的标记细胞的方法,对成体干细胞的示踪有重要意义;(2)经尾静脉及门静脉向肝大部切除大鼠输注MSCs,可以促进肝再生,但尾静脉移植途径肝内定值的MSCs少于门静脉移植。

全文目录


缩略词表  4-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-12
第一部分 大鼠骨髓间充质干细胞的培养及示踪优化  12-25
  0 引言  12
  1 材料和方法  12-16
  2 结果  16-21
  3 讨论  21-24
  4 小结  24-25
第二部分 骨髓间充质干细胞促进肝大部切除大鼠肝再生的研究  25-39
  0 引言  25
  1 材料和方法  25-30
  2 结果  30-35
  3 讨论  35-38
  4 小结  38-39
全文结论  39-40
参考文献  40-44
致谢  44-45
综述  45-51

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